www问答网
所有问题
当前搜索:
以质粒为模板进行扩增有什么
质粒扩增
的用途介绍
答:
这一实验主要用于获取较多的质粒,
质粒扩增
需要的源头质粒量非常小,1微克的质粒都已经能够满足扩增的需要,这也使得质粒的使用和赠送变得非常容易。质粒的用途往往是用于转染细胞,通过转染的方式让细胞表达质粒中携带的基因,从而研究该基因对应蛋白的性能。在基础细胞生物学研究中起着非常重要的作用。
用
质粒为模板扩增
目的片段怎么写
答:
在做定点突变的第一步中,我们需要对目标质粒进行扩增。根据查询蚂蚁文库显示。
1、扩增的是整个质粒,包括质粒载体和目的片段
。2、通过PCR扩增,我们可以获得大量的质粒DNA。3、在后续步骤中,我们会引入定点突变,然后将突变的质粒进行转化、筛选和鉴定。
以质粒为模板
,用全式金的FastPfufly
扩增
3100bp的片段,总是扩不出来,这...
答:
3100bp不算长,而且还是
质粒模板
,常规的就能
扩增
出来。主要还是要注意引物的设计,其Tm值和GC含量,还有就是该片段的GC含量,如果太高可以加点DMSO。剩下的关于酶之类的条件一般说明书上都有,仔细看看。
质粒
体外
扩增
答:
体外扩增 是把质粒提取出来,以质粒DNA做模板,设计合适引物 用PCR扩增其上某一段序列或者某个基因片段
。一般不是全部质粒序列的复制或扩增,因此不会是质粒本身的扩增。至于原理就是PCR的原理了,没特别。体内扩增,是因为质粒有其自身的ori序列(复制起始位点)本身就是一个独立的复制子,在细胞内可以...
一个目的基因在
质粒
上,如何将其
扩增
出来并做实时荧光定量PCR?
答:
这样就是跟踪PCR产物。楼主提取质粒以后需要经过一次琼脂糖凝胶电泳定量,然后对
质粒进行
稀释,稀释到适当浓度,不然无法确定需要加多少DNA模版在才能满足反应体系的要求,引物设计没有别的要求,只要能完整扩出楼主想要的基因就行。定量的话,根据机器收到的荧光信号就可以定量了。以上仅个人愚见。
以环状
质粒为模板
加引物甲乙丙,pcr
扩增
长度怎么看
答:
PCR
扩增
:设置PCR反应参数,包括温度程序和循环次数。普通的PCR程序包括一段热启动(热变性、退火和延伸)和多个循环阶段。循环阶段的次数会影响扩增的长度。3、最后,凝胶电泳:将PCR扩增产物
进行
凝胶电泳分析。将扩增产物与DNA大小标准一同加载到琼脂糖凝胶上,进行电泳分离。根据目标DNA预计的大小和标准DNA...
以质粒作为模板
,pcr出现拖尾现象,为
什么
?
答:
我觉得原因是:你用的
质粒
浓度太高了。你要是按照普通基因组DNA PCR的浓度来做质粒PCR,或者稀释了质粒DNA但不够倍数,那结果有拖带是可能的。我一般20ul体系,质粒DNA浓度只需要0.05ng/ul 然后只取0.5-1ul。反应25-30个循环就很亮了。
假设一段基因长度为800bp,现要求对其400位核苷酸
进行
突变
答:
首先将基因全长连在载体上构成质粒,然后
以质粒为模板
,用上图中的primer2/3为引物对整个质粒
进行扩增
。扩增产物主要是突变的基因(PCR产生的新质粒),但同时含有少量没突变的基因(作为模板的质粒)。因为
质粒扩增
时在Eco.li中会有甲基化修饰,所以用DpnI酶对PCR产物进行消化就可以破坏
模板质粒
。消化后...
PCR如何
扩增
大片段
质粒
??
答:
设计一对引物,针对基因两端(覆盖酶切位点),在上游引物中酶切位点后的一段序列中添加一个碱基,
扩增
以后,酶切产物和空载体,再连接一遍,转化,小提拿去测序。最好上游换另一个内切酶位点,这样方便双酶切检测,区别于原来的
质粒
。
如果
质粒
与目的基因结合的重组DNA和不含目的基因的质粒,同时在培养基...
答:
一般有两种方法,一是用目的基因的特异性引物以重组
质粒为模板
,进行PCR
扩增
。看能否出现目的基因的扩增产物。还有一种是将纯化的
质粒进行
酶切,因为目的基因连接到载体质粒上时两边都带有人工添加的酶切位点,只要用这些内切酶进行酶切,然后看能否有目的基因的片段被切下来,则可以判定目的基因有没有插入...
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
涓嬩竴椤
灏鹃〉
其他人还搜
质粒作为模板pcr条件
以环状质粒为模板pcr扩增
pcr可以扩增环状质粒吗
以质粒为模板扩增目的基因
从质粒中扩增目的基因
买的质粒怎么扩增
质粒和病料为模板那个更好
质粒可以当模板加入体系吗
质粒pcr扩增得到还是质粒吗