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内参的一抗和二抗
western
内参
多条带,是什么原因呢?是我的样品问题吗
答:
western
内参
多条带可能的原因有:抗体浓度过高;降低
一抗
、
二抗
的浓度。一抗的特异性不足;使用单克隆抗体。二抗的非特异性结合,不加一抗,其他操作不变,即可检测出二抗的非特异性的条带是否来自二抗的非特异性结合;此时需要重新选择二抗。内参发生了降解,降解产物成为了一抗或二抗的新的抗原,尤其是...
内参
一般用做
一抗
吗
答:
搞不太清楚你想说什么。
内参
抗体一般选择 β-actin,GAPDH。hsp90也OK。一般内参抗体都是鼠源的啊。既然
一抗
是鼠源,
二抗
是接HRP的羊抗鼠就很好理解啊。
WB检测抗体如何选择 (上)
答:
WB检测的基本原理不做细述,可根据以下图片脑补一下:WB实验中使用到的有三种抗体:
一抗
、
二抗和内参
抗体。一抗是唯一针对目标抗原的抗体,可以进行制备也可以购买现货,难度系数较高;二抗直接买就OK,只是需要留意下种属选择;内参抗体必不可少,是WB实验中的质控环节。那么,宝宝们在制备抗体或者选择抗...
一抗
孵育后
内参
要洗脱吗
答:
要。1、
一抗
孵育后
内参
和目的蛋白相差较大,孵育后洗脱避免了内参和目的蛋白对
二抗
的竞争性结合,一抗孵育后要洗脱内参。2、不洗脱时
内参一抗
结合二抗的能力强于目的蛋白,会导致目的蛋白做不出,洗脱有利于两者的结合。
做western blot时
内参
抗体如何选择?
答:
搞不太清楚你想说什么。
内参
抗体一般选择 β-actin,GAPDH。hsp90也OK。一般内参抗体都是鼠源的啊。既然
一抗
是鼠源,
二抗
是接HRP的羊抗鼠就很好理解啊。
关于WESTERN BLOT的
内参
答:
它是你的目的蛋白
的一
个参照,但是它的作用和mark还不一样,所以
内参
是一定要要的,否则,人家会质疑你实验的可信性。如果你的实验动物是大鼠,打个比方
一抗
是兔抗鼠吧或者其他的什么抗鼠的,
二抗
就是什么抗兔的,比如说羊抗兔之类,一抗最好买国外的,二抗国内的就可以了 ...
western blot
二抗
及
内参
怎样选择
答:
内参
bate-actin或GAPDH多为单抗,来源于小鼠,一般可与大鼠、小鼠、人、兔均有交叉反应,即可作为上述任一来源蛋白的内参。Actin分子量为42kD,为肌动蛋白 GAPDH分子量为36kD,为磷酸脱氢酶
wb中
一抗和内参
怎么加的
答:
western blot实验中,完成电泳及电转膜之后,转完后将膜用1×丽春红染液染5min(于脱色摇床上摇)。然后用水冲洗掉没染上的染液就可看到膜上的蛋白,根据目的蛋白大小选择合适的内参,剪开目的蛋白及内参条带,分别进行目的条带
一抗
的孵育和
内参的
孵育。按照所用抗体说明书,用TBST按说明书建议比例稀释...
western blot
内参
actin 是43还是45 kda
答:
因此不同的组织本来就应该选择不同的内参,不能一概而论。三、Western Blot中怎样使用内参呢?在Western Blot实验过程中使用的
内参的
方法有:超级简便的标记内参使用法:只要在
二抗
孵育时加入HRP标记内参抗体(
一抗
孵育时不加抗体,即HRP直接标记于内参一抗上),按照正常操作即可。普通内参:当目的蛋白的...
内参
配制方法
答:
内参
配制方法:WB操作简单,既可以定性分析表达产物,同时还可以指示目的蛋白量的相对变化。作为一种有活性的生物大分子,抗体和抗原的反应是比较复杂的,因此用来测定表达产物时存在着一定的不确定性。所以,在WB实验设计中加入良好的参照体系,对实验结果分析是非常有帮助的。 参照体系通常包括分子量Marker(...
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