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酶切产物纯化浓度低
DNA的纯度会不会影响
酶切
产生的质量?为什么
答:
DNA的纯度低,要看导致低的原因是什么?
一般来说可能的原因包括抽提时的乙醇或异丙醇残留、蛋白残留多、试剂中的杂质等
。一般来说会对后续的酶切有影响,尤其是乙醇残留或存在酶抑制剂等。你可以尝试一下先酶切看看,如果发现对酶切确有影响。最简单的方法就是
使用液体回收试剂盒对DNA进行纯化一下即可
。 本回答由提...
酶切
后跑胶怎么会这样?
答:
而且那些
浓度
比较低的地方,会不会是因为杂合体的缘故,本来浓度就只有一半。能不能试着把胶的浓度降低,让带分的再开点。实验中的这种现象谁也不能很确定的说出什么原因,还是得试。如果你觉得需要
纯化
,那就纯化一次试试好了!如果觉得
酶切
不充分,就延长下反应时间!实验细节我也不清楚,建议也只...
用于与载体连接的pcr
酶切产物
是如何
纯化
的 、、
答:
跑胶后找到目的片段,切胶回收,纯化的传统法就是将PCR产物加入2倍体积的乙醇-20度沉淀过夜后低速短暂离心(如 3000rpm离心1~2min),弃掉上清,然后用70%乙醇洗涤一次后,弃掉乙醇,放干后再用无菌水或者TE溶解.当然这种方法对PCR
产物纯化
后回收率是很低的,你需要多做几管PCR,然后一起纯化回收.但是现在...
...全血PCR
产物
测得DNA
浓度
5000多纳克 过柱子
纯化
后20微升体系测得浓度...
答:
首先检查你前后测浓度的单位是否一致,是否在仪器中正确设置了稀释倍数
,如果都是ng/ul,那你之前的产物浓度不是一般的高,如果你之前测定时仪器的单位是ng/ml,之后是ng/ul,那么这个回收率虽然偏低,但也可能。其次,你的目的片段大小。是否使用了正确的试剂盒:这个DNA纯化试剂盒是对基因组dna还是pcr...
切胶回收
浓度
小于10能用吗
答:
能用。试剂盒一般收率会在一半左右,如果同体积的话,最终切胶回收
浓度
大概25纳克每微升,就算
低于
10也能连,是足够用的。切胶,是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收,切胶回收是
纯化
方式的一种,比如做过单
酶切
之后,想要得到纯化的目的条带,就可以用刀把电泳后的亮带切下来,然后用胶回收试剂盒...
在测序前如何进行pcr
产物
的
酶切纯化
,注意我想知道的是用于测序的pcr产 ...
答:
一般是1ulpcr
产物
加2ul溶液。37度孵育15分钟,即可除去多余的引物以及dNTPs,然后80度,15分钟就可以使虾碱
酶
失活。这个方法的优点是简单、快速、省钱、不损失样品,缺点是对样品要求高,如果一次
纯化
测序结果不好还要重来,费时费力。所以现在测序公司一般都是使用胶回收试剂盒来纯化,这样虽然工作量比较...
质粒提取与
纯化
的区别做
酶切
的质粒需要做纯化吗
答:
每次取出一部分来,不反复冻融,保存会比较好 3.
酶切
质粒的
浓度
,通常浓度越高,质粒也会越稳定.以前我们实验室做的pET载体,保存在-20C半年多都能用,就是做得很浓 4.为了保险起见,可以在连接前取一小部分载体去电泳看一下,有没有降解,如果条带清晰,亮度也理想的话,没有问题,可以使用的.
酶切
技术的技术问题
答:
而该
酶浓度
约为15单位/微升,在除外酶降解的因素外,该酶可分解15μg的DNA,而一般从1-4ml菌液提出的DNA约为3μg,而PCR
纯化
后的
产物
(50体系)约为3μg,所以即便全部加进去,只要纯化的质量好,
酶切
完全切得动。2、酶切、回收后的PCR产物与载体的连接摩尔比的计算,回收的载体片段:回收的PCR...
分步双
酶切
答:
不用试剂盒,也不用再次
纯化
pcr
产物
,会损失。我可以告诉你步骤:如果两种酶的buffer浓度相同可以同时加进去切,如果不相同,先用
低浓度
切,再用高
浓度切
。我只说后一种:30/50ul体系中2ul第一种酶,3ul buffer,按照你pcr产物的亮度来配比,不足部分用水补充,反正达到30ul就可以了,切两个小时后...
酶切
反应注意事项
答:
目前大多数研究者遵循一条规则,即10个单位的内切酶可以切割1μg不同来源和纯度的DNA。通常,一个50μl的反应体系中,1μl的
酶
在1X NEBuffer终
浓度
及相应温度条件下反应1小时即可降解1μg已
纯化
好的DNA。如果加入更多的酶,则可相应缩短反应时间;如果减少酶的用量,对许多酶来说,相应延长反应时间...
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