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binding buffer原理
Dna胶回收实验中
binding
buffer
,wash solution ,elution buffer的作 ...
答:
用binding
buffer是为了增加洗脱柱对核酸的结合活性
;wash solution是洗掉柱子里除核酸物质以外的杂质;而shuelution buffer就是最后把DNA从柱子上洗脱下来使用的溶液,一般是pH=8.0的TE,dd水也可以。如果不是马上使用DNA,可以将切下的胶放入离心管中-20度保存,这样可以保存更长时间,而且对DNA影响较...
bindingbuffer
有毒吗
答:
没有,对人体没有多大的危害。LoadingBuffer主要是溴酚蓝和二甲苯氰,溴酚蓝指示液40%是糖,二甲苯氰对人体也没有太大的伤害。bindingbuffer是结合缓冲,
是为了增加洗脱柱对核酸的结合活性
,就是当往某些溶液中加入一定量的酸和碱时,有阻碍溶液pH变化的作用,称为缓冲作用,这样的溶液叫做缓冲液。
可以用elution
buffer
稀释dna吗
答:
顾名思义。
用binding buffer是为了增加洗脱柱对核酸的结合活性
;wash solution是洗掉柱子里除核酸物质以外的杂质;而elution buffer就是最后把DNA从柱子上洗脱下来使用的溶液,一般是pH=8.0的TE,dd水也可以。
DNA凝胶回收的问题
答:
提供高盐环境、洗去高浓度盐离子的同时使DNA留在柱上、洗脱DNA
,可以打电话给技术支持问一下哦。
请教ANNEXIN V-PI法检测凋亡的
原理
和相关试剂盒使用步骤
答:
2) 用预冷的PBS洗涤细胞两次,每次均在300g,4°C离心5min,收集1-5×105细胞。注意:在洗涤细胞时,尽量避免损伤细胞。3) 加入100µl 1×
Binding
Buffer
重悬细胞。4) 加入5µl Annexin V-FITC和5µl PI,轻轻混匀。 5) 避光、室温反应10 min。6) 加入400&...
请教ANNEXIN V-PI法检测凋亡的
原理
和相关试剂盒使用步骤
答:
贴壁细胞用不含EDTA的胰酶消化收集(注:胰酶消化时间不易过长,否则容易引起假阳性);2.用PBS洗涤细胞二次(2000rpm离心5min)收集1~5105细胞;3.加入500L的
Binding
Buffer
悬浮细胞;4.加入5L Annexin V-FITC混匀后,加入5L Propidium Iodide,混匀;5.室温、避光、反应5~15min;6.请在1 hour内...
DNA
binding
Buffer
中的poly-dIdC是什么有什么作用
答:
它由肌苷和胞嘧啶组成。由于其特定的结构,可抑制蛋白对标记探针的非特异结合,避免假复合物。 在凝胶迁移反应中加入poly(dI:dC)(dI:dC),可抑制粗制核抽提液中其它DNA结合蛋白结合,比如转录调节因子的非特异结合。当用纯化的蛋白作凝胶迁移反应时,不必一定加入poly(dI:dC)(dI:dC),如加入,则...
Loading
buffer
的作用
答:
因为WB主要只是测蛋白表达量,而不需要蛋白的高级结构;(3)使SDS与蛋白按比例结合,使蛋白表面均匀带上负电荷(具体
原理
参考 https://www.jianshu.com/p/1d1358ed6bf9 里面的SDS lysis
buffer
部分);(4)煮沸使蛋白酶失活,中止酶促反应,防止提取的蛋白质降解;(5)煮沸使DNA充分打断变性;
镍柱再生
原理
答:
1. 包含尿素的样品可直接进行SDS-PAGE分析,若样品中包含盐酸胍,在SDS-PAGE前则需先用含有尿素的
buffer
进行透析 2. 除利用咪唑洗脱蛋白,其它方法,如低pH值法等可被应用,详见说明书
Binding
buffer 中咪唑的浓度 在洗涤时所用的Binding buffer 中咪唑浓度越大,重组蛋白纯度越高。但过高的咪唑浓度...
GST pull-down 技术
原理
及实验流程——钟鼎生物
答:
(1)利用低压层析系统,细胞裂解上清液上样至GST
Binding
-
Buffer
预平衡的GST亲和层析柱;(2)用GST Binding-Buffer冲洗层析柱,至流出液OD280值到达基线;(3)用GST Elution-Buffer洗脱目的蛋白,收集流出液;(4)收集的蛋白溶液加入透析袋中,使用Tris-HCl透析过夜;(5)进行SDS-PAGE分析和WB分析。2....
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