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pcr引物多长合适
pcr引物
长度
答:
1、引物的长度一般为15-30 bp,常用的是18-27 bp,但不应大于38
,因为过长会导致其延伸温度大于74℃,不适于Taq DNA聚合酶进行反应。2、 引物序列在模板内应当没有相似性较高,尤其是3’端相似性较高的序列,否则容易导致错配。引物3’端出现3个以上的连续碱基,如GG...
PCR引物
的长短对扩增效果有什么影响?
答:
1. 引物长度:引物的最佳长度为24或25个碱基左右
。但是如果需要调整Tm值,引物的长度可以控制在21至28个碱基之间。当扩增≥10 kb长片段时,25-35个碱基之间的引物可以提供更好的结果。引物过短,会降低产物的特异性,每增加一个核苷酸,引物特异性可以提高 4 倍。引物过长,会使退火过程不完全,与模...
设计
PCR引物
时,越少越好的是
答:
长度。
1、pcr长度为15至30bp,一般为20至27mer
。2、引物的有效长度是Ln=2(G-C)+(A-T+,Ln值不能大于38,适延伸温度会超过TaqDNA聚合酶的最适温度(74C),不能保证产物的特异性。3、所以长度越少越好。
PCR反应
的
引物
有何种要求?
答:
2.引物长度一般在15~30碱基之间
。引物长度(primer length)常用的是18-27 bp,但不应大于38,因为过长会导致其延伸温度大于74℃,不适于Taq DNA 聚合酶进行反应。3.引物GC含量在40%~60%之间,Tm值最好接近72℃。GC含量(composition)过高或过低都不利于引发反应。上下游引物的GC含量不能相差太大...
qRE-
PCR中
,单链
引物
长度
最好
为多少
答:
15-30bp。1、在qRE-
PCR
实验中单链
引物
的长度一般为15-30bp,常用的是18-27bp,但不能大于38。2、因为单链引物过长会导至qRE-PCR实验中其延伸温度大于74℃,即Taq酶的最适延伸温度。
PCR引物
的制备有什么讲究吗?
答:
1、
引物
长度一般为15-30bp,常用的为18-27bp,但不能大于38bp;2、引物GC含量一般为40%-60%,以45-55%为宜,上下游引物GC含量和Tm值要保持接近;3、引物所对应的模板序列的Tm值
最好
在72℃左右,至少要在55-80℃之间,Tm值曲线以选取72度附近为佳,5'到 3’的下降形状也有利于引物与模板的...
实时荧光定量
PCR中
两种
引物
的设计有什么要求
答:
10、模板与稳定性较小的
引物
之间的Tm的差异越小,
PCR的
效率越高。因为解链温度也取决于它的长度,如果期待的产物长度等于或小于500bp,选用端的引物(16-18bp),如果产物长5kb,则用24bp的引物;11、在DNA测序和
PCR中最好
用5'末端稳定(GC含量多),而3'端不稳定(AT含量多)的引物,这种引物...
引物
设计原则是什么?
答:
④
引物
序列的GC含量一般为40-60%。GC含量过低,则AT含量高,与模板结合能力低;GC含量过高,容易产生二级结构,也不利于结合模板。上下游引物的GC含量不能相差太大。⑤引物Tm值范围为55-65℃。Tm值与
PCR反应
的退火温度相关,退火温度高,引物结合到模板的能力就差(但特异性好);退火温度低,引物结合...
知道
引物
怎么确定
pcr
产物的长度
答:
1、
引物
长度一般为15-30bp,常用的为18-27bp,但不能大于38bp; 2、引物GC含量一般为40%-60%,以45-55%为宜,上下游引物GC含量和Tm值要保持接近; 3、引物所对应的模板序列的Tm值
最好
在72℃左右,至少要在55-80℃之间,Tm值曲线以选取72度附近为佳。
PCR
是扩增数目的。 目的基因有700多,...
pcr引物
的设计有哪些要求
答:
2.解链温度(Tm值)3.避免
引物
内部 或引物之间存在互补序列(3个碱基),从而减少 引物二聚体 的形成以及引物内部 二级结构 的形成 4.G+C含量尽量控制在40%-60%之间。4钟碱基的分布应尽可能均匀。尽量避免 嘌呤 或 嘧啶 的连续排列,以及T在3'末端的重复排列 5.引物的3'末端
最好
是G或C,但...
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