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pcr技术引物与退火温度
退火
的
温度
选择决定于
引物
的碱基序列?
答:
退火就是DNA形成双链 温度越低越容易形成双链,但是反应过快,就容易错配 要尽量减慢反应,使他们有充分的时间来正确配对 所以要选择一个相对高温,又要保证他们能形成双链
引物
越长,
退火温度
越高,CG含量越高退火温度越高。原理还是和上面差不多的,自己理解一下 我觉得C说的没有什么问题我问同学...
pcr退火温度
高特异性强,为什么?..低 非特异多 为什么?
答:
甚至只有一条,也就是
引物和
目的序列的完美匹配, 因此特异性越高。反之,若
退火温度
低,引物和模板匹配低时,也能稳定存在,那么模板上可能存在很多区域能和引物上的少量碱基匹配,进行引发,因此dna条带会很多,非特异带增加。特异带是指你的目的带。非特异带是
pcr
中扩增出的非目的带。
PCR技术
反应过程中控制不同
温度
的意义?
答:
⑴
PCR技术
的基本原理:该技术是在模板DNA、
引物和
四种脱氧核糖核苷酸存在下,依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。DNA聚合酶以单链DNA为模板,借助一小段双链DNA来启动合成,通过一个或两个人工合成的寡核苷酸
引物与
单链DNA模板中的一段互补序列结合,形成部分双链。在适宜的
温度
和环境下,DNA聚合酶将脱氧单...
上游56,下游71,
退火温度
相差十几度怎样进行
pcr
答:
你设计的
引物退火温度
相差并不是太多的啊,我们一般将上下游引物退火温度平均值加2度作为退火温度,如果你不放心可以做个梯度
PCR
,一般可以筛选出相对较好的退火温度。如果还是没P出来可以用TouchDown PCR试试
如何设计
pcr引物
答:
2、PCR的技术的主要步骤:DNA变性:(90℃-96℃):双链DNA模板在热作用下,氢键断裂,形成单链DNA。
退火
:(60℃-65℃):系统
温度
降低,
引物与
DNA模板结合,形成局部双链。3、
PCR技术
的基本原理:类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。4、PCR技术的基本原理类似...
设计
PCR引物
的主要原则是什么?
答:
5)正向
引物与
探针离得越近越好,但不能重叠。6)
PCR
扩增产物长度: 引物的产物大小不要太大,一般在80-250bp之间都可;80~150 bp最为合适(可以延长至300 bp)。7)引物的
退火温度
要高,一般要在60度以上;要特别注意避免引物二聚体和非特异性扩增的存在。而且引物设计时应该考虑到引物要有不受...
pcr
的问题
答:
包括:解链、退火、延伸 最重要的步骤:退火 因为退火是决定
PCR
特异性和效率的关键,也是唯一可以调控的步骤,解链和延伸都是由酶的性质和模版长度决定的一个固定温度和时间,而退火的温度和时间的把控则是PCR的精髓。比如Touch-down就是
退火温度
先高后低,适用于杂带较多;Touch-up就是退火温度先低后...
各位高手谁能给我详细的讲解一下
PCR技术
的过程
答:
间后,使模板DNA双链或经
PCR
扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;②模板DNA与引物的
退火
(复性):模板DNA经加热变性成单链后,
温度
降至40~60℃左右,
引物与
模板DNA单链的互补序列配对结合;③引物的延伸:DNA模板--引物结合物在DNA聚合酶的作用下,于72℃左右,以dNTP为反应原料,...
简述
PCR技术
的基本原理及反应条件的选择
答:
PCR技术
的基本原理 类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸
引物
。PCR由变性--
退火
--延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;②模板DNA与引物的退火...
定量的
PCR退火温度和
荧光定量PCR是一样的吗
答:
某些变态的老外审稿并不认可单一的荧光定量
PCR
的结果,他们会同时需要作者做一个半定量RT-PCR来作为辅助证明.半定量RT-PCR的
引物和
荧光定量PCR的引物设计原则并不是一样的,换而言之,二者的引物并不是可以通用的.所以
退火温度
自然是不同的,具体怎么不同,要根据实际用到的引物去算.
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