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rna提取过程中DNA的影
分离mRNA
过程中
,如果
RNA
有
DNA
污染会有影响吗
答:
会有影响。因为
提取的RNA
有DNA污染,那么反转录以后的cDNA也就有基因组DNA污染,这样,扩增cDNA。都会出现杂带或非特异性扩增,对实验结果不好。由一个
DNA分子
,边解旋,边转录。利用细胞核内部的游离核糖核苷酸合成。合成规则遵循碱基互补配对原则。以上
过程
叫做转录,在细胞核中完成。接着,mRNA穿过核孔。
提取RNA
时如何去除
DNA的
污染
答:
直接加NaOH溶液与提取液混合搅拌,然后离心就可以了.因为RNA可溶于NaOH溶液,而
DNA
不可溶,离心后的上清液就不含有DNA了。
RNA提取步骤
:1. 匀浆处理:① 组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10%。② 单层培养细胞 直接在培养板中加...
...CDNA做底物总是能扩出来基因组
DNA的
产物长度
答:
如果提
RNA
有基因组污染不是用不用剧烈震荡能解决问题的,得把提的RNA用
Dna
seI消化。根据我的经验,
DNA
污染与Trizol的种类和你的材料性质有关,一般提的RNA都要经过DnaseI消化以确保除净DNA。至于RT-PCR的引物你如果不会设就找个师兄师姐代设一下吧,没什么难度,主要注意点你可以上网查查。
有关单细胞
提取RNA
,看大多都说直接裂解细胞后反转录,然后PCR。这样PCR时...
答:
不过还是建议你用
DNA
酶消化一下。。北京华越洋的
RNA提取
试剂盒,在
RNA提取过程中
清楚了DNA污染,所以得到的RNA没有任何DNA污染,可满足苛刻的荧光定量PCR对DNA无残留的要求。。北京华越洋生物。。外源RNA酶清除剂,代替致癌的DEPC,。。RNA提取必备!
RNA中DNA
残留,怎么判断?
答:
严格的说,
RNA
不允许一点点
DNA
残留,所以电泳看不出来不一定没有DNA残留。标准的做法是用跨内含子的引物扩增,看PCR产物来判断是否有DNA残留。
提取的RNA
里可能掺杂
DNA
吗
答:
因为
RNA的
260/280的值和DNA近似.电泳检测的话,主要是看RNA的含量.换而言之,实际上最相关的是你提取的时候的组织的生长状况.一般来说,如果是分生组织等提取
的DNA
,会有较大的RNA污染.这时候你做电泳可以明确看到RNA的条带,而且有时候会比DNA带更为明显.如果
提取过程中RNA
降解了,...
如何去除
RNA中的DNA
污染
答:
这个如果你做反转录的话,只能是用PCR检测了。电泳基本检测不出来。象现在的试剂盒或者TRIZOL提的
RNA
,除质量太差,一般含基因组很少。 如果RT-PCR发现结果不对,可以用那种不含RNA酶
的DNA
酶处理一下。 如果引物能避开的话,有点DNA也没关系。
提取的RNA
有
DNA
污染的话,电泳图会是怎么样的?
答:
如果污染基因组
DNA的
话,由于基因组DNA分子量大,电泳特别慢,因此通常会在加样孔周围看到EB强染信号。
RNA提取过程中
如何去除
DNA
污染
答:
离心取上清的时候,一定要小心不要取到中间的膜和下面的液体,如果已经污染DNA了,可以加无
RNA
酶
的DNA
酶,37度作用一小时就能去除了。
荧光定PCR中的注意事项
答:
影响荧光PCR的因素很多,但从操作和技术上来讲应该要注意一下几点:1.RNA的完整性 因为RNA一旦降解所定量的结果就不能正确反映样品中mRNA的量,所得的结果也是错误的。所以在
RNA提取过程中
要严格遵守操作规范,避免RNA酶的污染。2.RNA样品中的基因组
DNA
污染
提取的
RNA样品中不可避免地混有少量的基因组...
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