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二代测序文库构建
构建
基因
文库
的目的和意义?
答:
(1). 质粒文库 质粒是最早用于基因克隆的载体。现已有各种适用于不同工作的如克隆、表达、
测序
等专用商品质粒。但在
构建
基因文库上,由于质粒相对较小并只能容纳比自身更小的片段,因此它不能用于构建核基因组文库,通常只用来构建短序列的克隆文库。例如叶绿体DNA分子较小,可以用质粒构建叶绿体
DNA文库
。质粒载体可用于...
转录组
测序
和表达谱测序的区别是什么
答:
相对于传统芯片而言,转录组
测序
无需预先设计探针,即可对任意物种的任意细胞类型的转录组进行检测,能够提供更精确的数字化信号,更高的检测通量以及更广泛的检测范围,是目前深入研究转录组复杂性的强大工具。基因表达谱指通过
构建
处于某一特定状态下的细胞或组织的非偏性cDNA
文库
,大规模cDNA测序,收集cDNA...
基因组
测序
为什么要
构建
不同插入片段长的
文库
答:
现在全基因组
测序
用鸟枪法,把所有
DNA
打碎成短片段,测出所有片段的序列再用超级计算机进行拼接。你说的是老方法,先
构建
大的长片段
文库
,这些长片段互相重叠,能涵盖全部基因组,即所谓的骨架scaffold。然后在对文库里每一个克隆进行亚克隆,应该还进行亚亚克隆,得到可以直接测序的短片段克隆,即所谓的...
全外显子是根据什么建库的
答:
DNA
经酶法处理后打断为200 - 300 bp的小片段,利用Agilent SureSelect捕获外显子区域DNA片段用于测序。DNA经酶法处理打断为。。 bp的小片段,经末端修复、接头连接后,
构建测序文库
;文库变性为单链DNA后,加入生物素标记的与目标区域互补的探针进行双链复性,加入链霉素亲和素标记的磁珠,混合使生物素和链霉素亲和素...
RNA-seq中的常见问题汇总
答:
Paired-end方法是指在
构建
待测
DNA文库
时在两端的接头上都加上
测序
引物结合位点,在第一轮测序完成后,去除第一轮测序的模板链,用对读测序模块(Paired-End Module)引导互补链在原位置再生和扩增,以达到第二轮测序所用的模板量,进行第二轮互补链的合成测序(图2)。 flowcell:FC,一个FC就是一个载玻片状的载体,它...
基因组
dna文库
和cdna文库的区别
答:
基因组含有的基因在特定的组织细胞中只有一部分表达,而且处在不同环境条件、不同分化时期的细胞其基因表达的种类和强度也不尽相同,所以cDNA文库具有组织细胞特异性。cDNA文库显然比基因组
DNA文库
小得多,能够比较容易从中筛选克隆得到细胞特异表达的基因。但对真核细胞来说,从基因组DNA文库获得的基因与从...
基因的缩写必须写斜体吗?
答:
是的。这是国际命名委员会规定的,基因名字必须用小写斜体字母表示,蛋白第一个字母大写,不要斜体。现在比较正规的杂志社就要求按规定书写。如果已知,直接根据其两端序列,设计引物,采用PCR的方法直接可将该基因扩增出来。若为已知功能的未知基因,则根据其相近物种中的相似基因设计引物,然后PCR。 若为...
宏基因组
测序
都能得到那些结果?可以用于什么研究?
答:
宏基因组
测序
研究避开了微生物分离培养的过程,扩展了微生物资源的利用空间,为研究微生物相互作用提供了有效工具。阅微基因采用
第二代
高通量测序技术进行宏基因组学研究,无需构建克隆文库,可以直接对环境样品中的基因组片段进行测序,这避免了
文库构建
过程中利用宿主菌对样品进行克隆而引起的系统偏差,简化...
什么技术有助于测出人类基因组碱基对的全序列?
答:
用“酵母人工染色体(YAC)作为载体的载有人
DNA
片段的
文库
已包含了
构建
总体覆盖率为100%、具有高度代表性的片段重叠群”,近几年来又发展了可靠性更高的BAC、PAC库或cosmid库等。序列图谱 随着遗传图谱和物理图谱的完成,
测序
就成为重中之重的工作。DNA序列分析技术是一个包括制备DNA片段化及碱基分析、...
基因
文库
名词解释
答:
因此需要进行平末端修复。平末端修复使用特定的酶和化学物质将
DNA
片段两端的突出部分切除,使其具有互补性。4、连接连接体:连接体是一种短的DNA片段,它与DNA片段两端连接,为后续的
文库构建
提供必要的结构。连接体的设计需要考虑与
文库测序
引物的匹配度,以确保后续的测序反应能够顺利进行。
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