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双酶切buffer对应表
做重组质粒
双酶切
验证,酶切后跑电泳结果条带很模糊是什么原因?
答:
可能
酶
过量或者加的质粒体积大带进去杂质产生星号活性。
进行质粒
双酶切
时,两种酶同时加效果好,还是两种酶分开加效果好?谢谢...
答:
看是哪两种酶。如果两种酶在同一种
buffer
里的
酶切
效率都不错,那就同时加;如果很难找到一种同时合适两种酶的buffer,就只能分开加。
载体
双酶切
后消失,怎样解决
答:
减少
酶
用量试下
载体上临近的两个酶切位点可以设计起来做
双酶切
吗?
答:
...山雨(站内联系TA)这样子不好,酶切的效果好需要一定长度是保护碱基,挨着的位点切不动,分步切的话,
buffer
不一样,效果也非常一般,建议在引物上加酶切位点,这样就不受载体的限制了。cory0931(站内联系TA)on yr re:质粒的两个酶切位点,紧挨着的话,势必会影响
双酶切
效果,原因是:内切酶...
载体
双酶切
后消失,怎样解决
答:
温度尽量低,切的时间长一点。。。估计是出信号活性了,我原来切Sma1、Sac1时也出过这事,最后是16度切了22小时才过关。。。切了9次。。载体我不知道,要不还有个可能,这两个酶的
酶切
位点过近也是切不出来的,但这个我没亲眼看见,是师姐告诉我的 另外,最好是PCR或提质粒产物不经过冷冻,...
载体上临近的两个酶切位点可以设计起来做
双酶切
吗?
答:
酶切的效果好需要一定长度是保护碱基,挨着的位点切不动,分步切的话,
buffer
不一样,效果也非常一般,建议在引物上加酶切位点,这样就不受载体的限制了。cory0931(站内联系TA)on yr re:质粒的两个酶切位点,紧挨着的话,势必会影响
双酶切
效果,原因是:内切酶结合时,一般都是需要微点周围有多余...
双酶切
质粒后电泳 的问题
答:
很显然是质粒发生了自连啦。切开的2个质粒连起来了,因此相当于2个质粒的大小。你需采用磷酸化避免自连发生。
载体
酶切
切不出条带是怎么回事?
答:
1.是
酶切
单口还是酶切双口?酶切单口没条带 2.酶切的两个酶切位点距离是多大?几个bp的话是看不出条带的,且很难切,需要加长酶切时间;几十个bp的话,跑太快了,电泳时间一长,就跑出琼脂糖凝胶了,也看不到 3.酶切能切出较大条带的,但是实际酶切时电泳图上没有,那么:酶用对了没...
HindIII、XhoI
双酶切
答:
这样且可能不能全部切开,如果只是鉴定的话可以,但要是用于连接就会有大量的假阳性。你可以考虑先用一种
酶切
,回收后换另一种酶切,都是用最适
Buffer
,效果应该会好一些
质粒DNA
酶切
不完全是什么现象
答:
现象的话你通过跑一个琼脂糖凝胶电泳就能看出来,空载质粒完全切割的话应该只有一条带,没切开的话会有2-3条带,而且位置比较高。 如果是连入了目的片段的载体,那么完全切割只有两条带。未完全切割的话会有3-4条带左右。产生原因很多:1.可能是酶切的时间不够。2.可能是你用
双酶切
的时候
buffer
的...
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