二代测序对混合样品的检测。好比几种肉样等比例混合,PCR扩增后进行二代测序

我想说这中间需要什么步骤去先将这几种成分分离,还是混合样直接测序,测序仪可以同时检测么?求高手赐教

第1个回答  推荐于2017-09-06

你的问题可以理解为多个样本同时测序,怎么区分样本

二代测序文库构建的步骤是这样的:

    DNA样本的打断(每个样本独立做)

    打断后的DNA的修补(修补缺口),然后加一个A碱基,随后基于所加的A碱基,连接接头。也就是这里是区分样本的关键,一般接头分为三部分  连接logo序列的互补序列+测序引物+barcord(即DNA条形码,这样可以通过几个碱基的组合来区分是什么样本,一般是P7接头是这样的,就不展开说了,想了解可以百度一下),所以每个样本也就可以理解为具有一个特征性的序列。

    最后进行PCR,上机测序

    数据分析时,基于barcord信息,区分不同样本的数据。

追问

但是如果你不知道这个肉样的成分,它可能同时含有几种肉呢,难道在样本处理前先进性PCR后电泳分离纯化么,那就没有测序的意义了不是?

追答

你的意思不同的肉是不同类型对样本

    样本一般如果是同样来源,比如都是一个人的样本,那么这个人所有组织的DNA都是一样的(这里不谈体细胞突变)

    如果里面含有几种肉,意思DNA序列是不一样的,如果同一来源(比如都是人),那么是区分不了。这个专业术语叫组织异质性,如果说不同来源,比如不通的物种,那么可以通过最后测序所得数据看一下来源什么物种。

    还有一种单细胞测序,测序的样本来源为单细胞(即每次测序的样本为一个单细胞),所以可以区分。

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