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WB内参条带不均匀
WB内参
的表达不一样怎么办。提完蛋白后用BCA试剂盒定量,可是后来跑出...
答:
那很有可能是定量的时候不准
,建议你根据内参条带的亮度调整上样量,保证内参一致的情况下再看目的条带的变化
western blot的
内参
总是做不好。。。老是
条带不
一致
答:
1,
如果是组织样品确实不好做,可以先用0.45滤膜过滤一下
2,可以第一次做的时候多准备些煮好的样品,上样用一部分,其它冻-20,出来结果后根据结果再调整下一次上样的多少,这样不用重新冻融原来的样品,因为没煮过的样品冻融再测浓度会因为一些蛋白降解和沉淀的问题导致和上次成分不一样,3,实...
western
内参
位置不对
答:
当条带所示的实际大小同理论有偏差时,
可能由以下一些原因导致:蛋白发生如磷酸化、糖基化等翻译后修饰时条带会上移
,蛋白发生剪切(如前体)时条带会下移,蛋白存在不同的可变剪切体或亚型,强相互作用大分子存在时变性不彻底。此外,WB实验中使用的预染蛋白marker由于携带染料程度不稳定的原因,也可能...
Western blot
内参跑不齐
怎么调整
答:
第二,
内参跑不齐
。
一般是跑胶时电流或电压太大
。还有可能是样品中参杂着盐离子等其他物质也会造成跑不齐。第三,PAGE胶的制备也很关键。看到条带信号连在一起,一方面因为胶不好,样品扩散,另一方面蛋白表达量 高,曝光时间长。第四,转膜的效率会不会是不一致的,一抗、二抗的接合GAPDH不好。...
western
内参不
齐能比较吗
答:
不能比较。内参不齐,
一般是跑胶时电流或电压太大,或者是是样品中参杂着盐离子等其他物质也会造成跑不齐
,内参不一样,做内参条带时的曝光量也不一样,所以不同膜之间不能互相比较。
western blot 的
内参不
一致,急求助
答:
一旦出现上述三种
内参
同时发生变化,如果是总蛋白可以用胞核的内参如PCNA,TATA-box bingding protein(TBP)甚至线粒体的内参来代替,当然一般这种可能性出现的几率微乎其微。不同异构体表达对蛋白的检测是有很大的影响,买抗体前要好好熟悉自己的目的蛋白,很多抗体杂不出
条带
其实未必是抗体质量的问题。很多公司的内参...
wb内参不
齐数据能用吗
答:
能。根据查询wb官网公开信息得知,
wb内参不
齐数据能用。确认每个样品表达GAPDH的量是否一样,不同细菌可能表达量不一样,造成信号强弱不一样。
WB的内参
有曝光而目的基因
条带
却空白——个人经验荟萃!
答:
答:切胶也没有问题,就是
内参条带
切的有点问题,抗体说明书的分子量是36KD,实际分子量是39KD。3、组织蛋白表达量太少了?答:这个可能性最大,目前我的
WB
蛋白量是30ug,进一步可以考虑用到50ug左右。4、因为目的蛋白是催化酶,会不会提蛋白时没使用相关蛋白酶抑制剂(如cokertail等),导致蛋白...
做好westernblot需要注意各种细节,转给需要的你!
视频时间 1:50
WB
相关技巧--quantity one软件调节
内参
答:
一般可以用image J 软件或者quantity one软件进行操作, 原理为 :image J 是依据灰度值(也就是白色到黑色的颜色变化程度)进行的调节;quantity one是依据密度或者体积(也就是
条带
的大小); 结果: quantity one 貌似用体积方法好用一点点。流程如下:打开quantity one 软件 之后导入图片(...
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