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pcr引物设计
PCR引物
如何
设计
?
答:
引物设计
是决定
PCR
反应成败的最重要因素。引物设计有两个主要考虑因素:特异性和扩增效率。特异性是由错配的频率决定的,特异性差的引物易产生错误的扩增产物。扩增效率是指引物以每循环增加两倍扩增产物达到理论最优的能力。遵循原则如下:1. 引物长度:引物的最佳长度为24或25个碱基左右。但是如果需要调整...
PCR引物
如何优化
设计
?
答:
1、
引物
最好在模板cDNA的保守区内
设计
。2、引物长度一般在15-30碱基之间。3、引物GC含量在40%-60%之间,Tm值最好接近72℃。4、引物3′端要避开密码子的第3位。5、引物3′端不能选择A,最好选择T。6、碱基要随机分布。7、引物自身及引物之间不应存在互补序列。8、引物5′端和中间△G值应该相对...
PCR引物
怎么
设计
?
答:
1、
引物
的长度一般为15-30 bp,常用的是18-27 bp,但不应大于38,因为过长会导致其延伸温度大于74℃,不适于Taq DNA聚合酶进行反应。2、 引物序列在模板内应当没有相似性较高,尤其是3’端相似性较高的序列,否则容易导致错配。引物3’端出现3个以上的连续碱基,如GG...
在
pcr
实验中,
引物
的
设计
一般有哪些要求
答:
引物设计
原则:长度: 18~30 bp, 20 bp左右最为常用。引物过短易导致非特异性打增;较长引物特异性强,但退火效率低,且易形成二级结构,从而导致
PCR
产量少。二级结构:引物二聚体及发夹结构的能值过高(大于4.5 kcal/mol )易导致产生引物二聚体带,并且降低有效引物浓度,使PCR反应不能正常进...
pcr
扩增中,如何
设计引物
?
答:
1、引物5撇端可以修饰。引物3撇端不可修饰。引物3撇端要避开密码子的第3位。2、引物设计需要注意的地方很多,在大多数情况下,我们都是在知道已知模板序列时进行PCR扩增的。设计的目的是在两个目标间取得平衡:扩增特异性和扩增效率。3、
PCR引物设计
的11条黄金法则引物最好在模板cDNA的保守区内设计。
PCR
的
引物
如何
设计
?
答:
3、
引物
所对应的模板序列的Tm值最好在72℃左右,至少要在55-80℃之间,Tm值曲线以选取72度附近为佳,5'到 3’的下降形状也有利于引物与模板的结合;4、引物之间:两个引物之间不应有多于4个的互补或同源碱基,不然会形成引物二聚体,尤应避免3’端的互补重叠。
PCR
的
引物
怎样
设计
,
答:
PCR引物设计
的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列.因此,引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否.要设计引物首先要找到DNA序列的保守区.同时应预测将要扩增的片段单链是否形成二级结构.如这个区域单链能形成二级结构,就要避开它.如这一段不能形成二级结构,那就可以在这一...
如何进行
引物设计
?
答:
1、网址
引物设计
和验证的推荐网站为:Primer-Blast。这是一个专门设计用于在已知序列上
设计引物
或探针的工具。使用BLAST-Primer,您可以输入一个序列或一组序列,并为这些序列设计引物或探针,以便用于
PCR
扩增或杂交检测等分子生物学实验。需要注意的是,NCBI还有一个网站叫:BLAST。注意二者不要弄混。BLAST...
【科研】
PCR引物设计
原则
答:
3、
PCR引物设计
的11条黄金法则引物最好在模板cDNA的保守区内设计。DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。4、引物设计原则长度:15—30bp,其有效长度[Ln=2(G十C)十(A十T)]一般不大于38,否则PCR的最适延伸温度会超过Taq酶的最佳作用温度(74度),从而降低产物的特异性。5、PCR引物...
如何
设计pcr引物
答:
pcr扩增中,如何设计引物?1、引物5撇端可以修饰。引物3撇端不可修饰。引物3撇端要避开密码子的第3位。2、引物设计需要注意的地方很多,在大多数情况下,我们都是在知道已知模板序列时进行PCR扩增的。设计的目的是在两个目标间取得平衡:扩增特异性和扩增效率。3、
PCR引物设计
的11条黄金法则 引物最好在...
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