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pcr技术引物与退火温度
PCR
反应
退火温度
的高低与什么因素有关
答:
退火温度
是影响
PCR
反应特异性的重要因素.
引物与
模板复性所需要的退火温度取决于引物的长度、碱基组成及其浓度.引物长度越短,引物中G+C的含量越低,所需的退火温度越低.虽然降低退火温度可能增加扩增产量,但引物与模板间的错配现象也会增多,导致非特异性扩增上升.相反,提高退火温度虽然可以提高反应的特异性,...
引物退火温度
设计技巧是什么?
答:
PCR引物
设计中的一个重要参数即是熔解温度(Tm)。这是当50%的
引物和
互补序列表现为双链DNA分子时的温度。Tm对于设定
PCR退火温度
是必需的。在理想状态下,退火温度足够低,以保证引物同目的序列有效退火,同时还要足够高,以减少非特异性结合。合理的退火温度从55℃到70℃。退火温度一般设定比引物的Tm低5...
上下游
引物退火温度
分别为47、49℃,如何设置温度梯度
PCR
最合适
答:
博凌科为-为你解答:上下游
温度
很接近啊,45度,上下5度,0.2每个梯度。或者直接用47度P
pcr退火温度
怎么确定?
答:
计算
退火温度
的方法:1.退火温度=4×(G+C)+2×(A+T)-(5~8) 只是粗算,有时不灵,但比较简便.2.用primer5(or oligo6)计算,
引物
配对好后,primer5可以显示Tm,我认为这个值就是退火温度,我的经验再加2 or 3度最好.3.合成引物的单子上也有个Tm,减去5~8也可,但有些公司提供的...
PCR
反应
退火温度
的高低与什么因素有关
答:
退火温度
是影响
PCR
反应特异性的重要因素。
引物与
模板复性所需要的退火温度取决于引物的长度、碱基组成及其浓度。引物长度越短,引物中G+C的含量越低,所需的退火温度越低。虽然降低退火温度可能增加扩增产量,但引物与模板间的错配现象也会增多,导致非特异性扩增上升。相反,提高退火温度虽然可以提高反应的特异性,但会引起...
测序
pcr
反应
退火温度
为什么是50
答:
或一列(8个孔)中每个孔的温度都不同,你在相应的孔中放入待反应的
PCR
混合液(保证每孔中反应液一致),记录相应的温度,PCR产物经琼脂糖凝胶或PAGE凝胶电泳检测目的产物浓度,有无非目的产物,目的条带亮度高低,有无
引物
二聚体,有没有非特异性扩增条带等。选择最优一个温度作为
退火温度
即可 ...
设计
引物
的时候上下游引物的
退火温度
分别是56.9
和
56摄氏度,
PCR
时退火...
答:
一般认为Tm-5度。但是要看你的Tm计算方法,不同公司合成的
引物
得出的Tm都不一样,你可以做个梯度
PCR
看看最适
退火温度
,以后就有经验了。
重叠
pcr引物退火温度
差太多怎么办
答:
PCR技术
必须工合合理
引物
提取品DNA,才进行自热循环进行产物鉴定与析 引物设计与合目前能少数技术力量较强研究院、所进行临床应用需购买PCR检测试剂盒展工作PCR自热循环影响素同DNA品PCR反应各种份加入量温度循环参数均致 现几种主要影响素介绍 、温度循环参数 PCR自热循环关键素变性
与退火温度
操作范例其...
PCR
的原理是什么
答:
PCR原理:DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链,在DNA聚合酶的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。
PCR技术
的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸
引物
。PCR由变性--
退火
--延伸三个基本反应...
PCR退火温度
如何设置
答:
一般是
引物
Tm值减去5度~但
退火温度
不能太低~否则会造成非特异性结合~
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