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wb怎么跑内参
WB
相关技巧--quantity one软件调节
内参
答:
一般可以用image J 软件或者quantity one软件进行操作
, 原理为 :image J 是依据灰度值(也就是白色到黑色的颜色变化程度)进行的调节;quantity one是依据密度或者体积(也就是条带的大小); 结果: quantity one 貌似用体积方法好用一点点。流程如下:打开quantity one 软件 之后导入图片(...
wb
中一抗和
内参怎么
加的
答:
western blot实验中,完成电泳及电转膜之后,转完后将膜用1×丽春红染液染5min(于脱色摇床上摇)。然后用水冲洗掉没染上的染液就可看到膜上的蛋白,根据目的蛋白大小选择合适的
内参
,剪开目的蛋白及内参条带,分别进行目的条带一抗的孵育和内参的孵育。按照所用抗体说明书,用TBST按说明书建议比例稀释...
wb如何
切
内参
答:
wb切内参步骤如下:1、打开WB软件并打开需要处理的数据集合。2、在数据集合的第一行或第一列中找到需要切片的内参
,例如性别、年龄、地区等。3、在数据集合的顶部或左侧创建数据透视表。具体操作为:选择需要切片的内参,将其拖动到“行”或“列”区域,并将需要查看的指标拖动到“值”区域。4、根据...
westernblot
内参
GAPDH成功了
答:
眼瞅着下午五点了,而且内参的条带已经出来了,
索性把电压调到了150V,没到半小时,就跑完了
。5.转膜。电泳的过程相对比较顺利。不过切胶也切了我大半天,犹豫怎么下手就花了10分钟,现在想来,就是目标条带的判断准确之后,先切去浓缩胶和不要的孔道,然后切去剩下的分离胶。剪PVDF膜和活化膜,...
内参
配制方法
答:
在
WB
中使用
内参
其实就是在WB过程中的另外用内参对应的抗体检测内参,这样在检测目的产物的同时可以检测内参的表达,由于内参在各组织和细胞中的表达相对恒定,借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差,这样半定量的结果才更为可信。此外使用内参可以作为空白对照,检测蛋白转膜情况是否*、整个WB显色...
Western blot
内参跑
不齐
怎么
调整
答:
第一,应该确认每个样品表达GAPDH的量一样,虽然是持家基因,本人觉得不同细菌可能表达量不一样,造成信号强弱不一样。可以通过考马斯亮蓝染色来确定上样量的差异,调整上样量一样再检测GAPDH。第二,
内参跑
不齐。一般是跑胶时电流或电压太大。还有可能是样品中参杂着盐离子等其他物质也会造成跑不齐。
wb跑内参
和目的蛋白区别
答:
wb跑内参
和目的蛋白区别:wb跑内参内参通常是在被检样本中高表达且表达水平相对稳定的蛋白。
WB
可以对目的蛋白进行半定量分析,判断不同样品中目的蛋白表达含量的多少,就是取决于内参的标定。WB又称为免疫印迹 (immune blot) ,是根据抗原抗体的特异性结合半定量的检测样品中的某种蛋白的方法。蛋白质印迹 ...
westernblot
内参
蛋白什么时候加
答:
内参
检测的时候加。在
WB
实验中,除了需要进行蛋白抽提、蛋白定量、等量蛋白上样电泳、转膜、靶蛋白抗体孵育、显色等常规步骤以外,还需要极其关键的一步,那就是内参检测,通过内参蛋白的表达量作为参照,校正蛋白定量和上样过程中存在的实验误差,保证实验结果的准确性。
Western样品和
内参
一定要在一张膜上么
答:
应该说目的和
内参
理论上来说是要同一条泳道跑出来的,敷抗体的时候可以混合了一起敷在同一张膜上,如果目的和内参分子量相差比较大为了节约抗体也可以把膜裁开来分别敷,不影响结果的。
wb
一抗和
内参
是分开孵的吗
答:
是。一抗是针对目标蛋白的特异性抗体,而
内参
是用于保证实验的可重复性和可比性的内源性参照蛋白,在实验过程中,通常先进行一抗的孵育,以检测目标蛋白的表达情况,然后在清洗掉未结合的一抗后,进行内参的孵育。
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