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双酶切buffer通用表
双酶切
时,是直接用pcr产物就可以,还是需要
答:
1、回收PCR产物:在进行PCR扩增时候,给引物两端设计好酶切位点,一般说来,限制酶的 选择非常重要,尽量选择粘端酶切和 那些酶切效率高的限制酶,如BamHI,HindIII,提前看好各公司的
双切
酶所用公用的
BUFFER
,以及各酶在公用BUFFER里的效率。选好酶切位点后,在各个酶的两边加上保护碱基。
双酶切
...
相隔1Kb的两个酶切位点在进行
双酶切
时会破坏彼此的酶切位点吗?如果会...
答:
过柱后再切A。如果两种都没问题,可能要考虑是不是两种酶一起
双酶切
的时候,buffer或者温度选的不合适,或者是其中一个酶产生了星号活性,有非特异切割,导致你目前碰到的问题。如果上述都没问题,那么说明AB两个酶一起
双切
是不应该有问题。如果发现找不到合适的
通用buffer
,最后就还是只能分开切了。
nde1和not1
双酶切
效率高吗
答:
由这两种酶组成的
双酶切
体系并不需要添加BSA,请你仔细核对,两种酶的最适反应温度均为37摄氏度所以双酶切温度应为37摄氏度。 如果选用TaKaRa的限制性内切酶那么
Buffer
应使用H Buffer,对于50 μl的酶切体系而言应分别加入1.5 μl的Xho1和Nde1并且。
HindIII、XhoI
双酶切
答:
这样且可能不能全部切开,如果只是鉴定的话可以,但要是用于连接就会有大量的假阳性。你可以考虑先用一种
酶切
,回收后换另一种酶切,都是用最适
Buffer
,效果应该会好一些
mysql中的表空间的概念是逻辑概念还是物理概念
答:
Query OK, 0 rows affected (0.04 sec)3. 可以用 optimize table 来收缩或者重建经常增删改查的表。一般过程是这样的:建立和原来表一样的表结构和数据文件,把真实数据复制到临时文件,再删掉原始表定义和数据文件,最后把临时文件的名字改为和原始表一样的。三、
通用表
空间 通用表空间先是出现在 ...
表空间和数据文件的关系?
答:
Query OK, 0 rows affected (0.04 sec)3. 可以用 optimize table 来收缩或者重建经常增删改查的表。一般过程是这样的:建立和原来表一样的表结构和数据文件,把真实数据复制到临时文件,再删掉原始表定义和数据文件,最后把临时文件的名字改为和原始表一样的。三、
通用表
空间 通用表空间先是出现在 ...
查看数据库中有哪些表空间
答:
Query OK, 0 rows affected (0.04 sec)3. 可以用 optimize table 来收缩或者重建经常增删改查的表。一般过程是这样的:建立和原来表一样的表结构和数据文件,把真实数据复制到临时文件,再删掉原始表定义和数据文件,最后把临时文件的名字改为和原始表一样的。三、
通用表
空间 通用表空间先是出现在 ...
我想做
双酶切
,但是这两种酶是不同公司的,一个takara一个NEB,有没有什...
答:
分开,因为
buffer
不同。可以先用效率高的
酶切
,回收后再用效率低的酶切,再回收,用于后续实验。
载体上临近的两个酶切位点可以设计起来做
双酶切
吗?
答:
酶切的效果好需要一定长度是保护碱基,挨着的位点切不动,分步切的话,
buffer
不一样,效果也非常一般,建议在引物上加酶切位点,这样就不受载体的限制了。cory0931(站内联系TA)on yr re:质粒的两个酶切位点,紧挨着的话,势必会影响
双酶切
效果,原因是:内切酶结合时,一般都是需要微点周围有多余...
酶切
产物电泳检测无条带这是怎么回事?
答:
1、我不建议酶用1ul,商品化的酶都是浓缩酶,0.1-0.2就足够。太多的酶可能会有星活性。2、如果DNA提取质量高,没有蛋白污染,那么过夜没问题,否则也不建议超长时间酶切;3、用多少质粒不是看体积,只要100ng就看得见,先定量质粒。做
双酶切
,如果2个片段都不太小,那么用200ng的质粒保证可以...
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