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大肠杆菌扩增质粒
质粒
小提试剂盒中的p1 p2 p3分别有什么作用
答:
p1:葡萄糖使悬浮后的
大肠杆菌
不会快速沉积到管子的底部;EDTA是Ca²⁺和Mg²⁺等二价金属离子的螯合剂,其主要目的是为了螯合二价金属离子从而达到抑制DNase的活性;可添加RNase A消化RNA。p2:此步为碱处理。其中NaOH主要是为了溶解细胞,释放DNA,因为在强碱性的情况下,细胞膜...
线性
质粒
可以转入
大肠杆菌
嘛
答:
可以。线性
质粒
是一种可以在细菌中复制的DNA分子,具有自我复制的能力。
大肠杆菌
是一种常用的受体细胞,可以接受外源基因的转入。因此线性质粒可以作为载体,将外源基因导入大肠杆菌中。
植物表达载体构建的全过程?
答:
表明植物表达载体pBI121�hIL�12构建成功.2.3转化农杆菌的PCR检测从三亲融合后的农杆菌中提取mini�Ti
质粒
,进行PCR
扩增
,扩增出大小约1600 bp的片段,与来自
大肠杆菌
DH5α中的重组质粒pBI121�hIL�12为模板的PCR产物一致,而对照空载根癌农杆菌单菌落为...
大肠杆菌
中的
质粒
能表达吗
答:
当然能表达了,举个最简单的例子:抗氨苄
大肠杆菌
的抗氨苄基因就位于
质粒
上,可以在含有氨苄青霉素的培养基里生长~但是并不是所有的大肠杆菌都含质粒~
质粒转化
大肠杆菌质粒
浓度
答:
1、首先制备含有Amp抗生素的LB平板,终浓度为50。2、其次取一个1.5ml离心管,加入100感受态细胞悬液,置冰上加入20ul
质粒
T+G,用移液器轻柔混匀,静止20分钟。3、最后加入液体培养基使细菌恢复正常,静置12-16个小时即可。
pcdna3.1作为载体的重组
质粒
转入
大肠杆菌
怎么检测筛选
答:
pcDNA3.1本身就有抗性,可以用抗性培养基进行初步筛选,然后长出来的克隆筛选,一般为三种:1.设计
扩增
外源基因片段的引物,进行菌液PCR 2.提取
质粒
,做质粒双酶切--Hind Ⅲ和EcoRⅠ(这个最为准确)3.设计引物做测序
大肠杆菌
提取的
质粒
有哪三种构型
答:
在琼脂糖凝胶电泳中存在三条电泳条带,按照Marker的位置从大到小依次为:线性DNA,松散的环状DNA,超螺旋结构DNA(在松散环状DNA的基础上进一步盘曲折叠形成的紧致的环状DNA)其实这三种结构分子量相同,由于空间结构的差异导致在琼脂糖凝胶电泳中迁移率不同,因此出现三条条带。标准的
质粒
提取实验中只存在...
基因工程中的
质粒
是什么东西
答:
在基因工程中,
质粒
是最常用的目的基因的运载体。质粒存在于许多细菌以及酵母菌等生物中(
大肠杆菌
、枯草杆菌、土壤农杆菌等细菌中都有质粒),是细胞染色体外能够自主复制的很小的环状的DNA分子。最常用的质粒是大肠杆菌的质粒。
大肠杆菌
,时间30小时了,这种菌提取
质粒
dna,里面的碱基序列会不会变异...
答:
这个是有点久了,一般不要超过16小时,过夜摇12小时就可以了。因为12-16小时就到达平台期了,此后就衰退了,提出的
质粒
会有突变的。建议还是老老实实重新摇一次吧。不然凑合着做后面会出问题的。
PCR
扩增
和菌体内扩增DNA有何区别?
答:
当然有别的目的。举个最常见的例子,对未知序列进行测序。你确实可以通过PCR把整段基因都
扩增
出来,但是因为现在测序的技术限制,DNA片段两端的序列是测不出来的,直接PCR产物测序的结果只能获得基因中间部分序列。所以我需要利用细菌的T载体进行TA克隆,把基因整合到
质粒
上扩增,然后用质粒上的引物再PCR,让...
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