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请问你是如何解决trizol法提RNA中的DNA污染?谢谢。
如题所述
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推荐答案 2010-12-16
要除RNA中的DNA最常用的是DNA酶1,很多公司有买的。但是我们用过发现效果并不好,因为你消化DNA的时候对RNA还是有影响的,所以我不建议这么做。你最好在如何更好的提取RNA上做文章,提高RNA的纯度。另外做RT-PCR时有一点DNA的污染其实影响不大,而且往往是难免的,关键是没后面的PCR设计好了,应该是没有问题的。
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其他回答
第1个回答 2010-12-16
RNA用70%或75%乙醇沉淀后,离心去上清,加入30~50ulDEPC水溶解,如何加入DNA酶1(10U/ul)混匀,37摄氏度温育30分钟就可以去除DNA了。
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第2个回答 2010-12-16
建议使用试剂盒提取,宝公司、甚至上海生工的总RNA盒子都宣称不会含gDNA污染。如果是用来做RT,少许gDNA污染关系不大,定量PCR的话DNase I处理是必须的。
第3个回答 2010-12-16
NaCl沉淀法可以析出DNA
相似回答
TRIzol法提
取
RNA如何
避免
DNA污染
答:
植物RNA本来就比价难提取,
TRIzol提取时裂解要充分 剧烈震荡,分层静置,离心之后自然就分为两层,取RNA层的时候吸取一定要小心
,吸得时候一定要缓慢,不要怕浪费,有的人吸得很多,很怕浪费,结果就吸到了中间层和下层,个人觉得吸取80%最多了,再多就很容易吸到杂质了,操作要小心,动作快速准却,这样才能提到...
trizol法提
取
rna
如何
去除
dna
答:
trizol法提取rna 如何去除dna 1,
裂解组织或者细胞使用的TRIzol量偏少; 2,使用的组织材料中含有大量的有机溶剂(如:乙醇/异丙醇等)、高纯度的Buffer、碱性溶剂等
; 3,如果提取的RNA中含有DNA时,也可以使用DNase I进行DNA消化。这个如果你做反转录的话,只能是用PCR检测了。电泳基本检测不出来。象...
如何
在提取
RNA
过程中快速有效的处理样品
答:
如何去除RNA提取过程中的蛋白质污染提取RNA时如何去除DNA的污染的方法:注意实验室的标准化问题,注意污染的存在
,同时严格按照说明书上的操作应该没有问题。发现DNA污染,用DNAse I 消化1小时,37度离心取上清的时候,一定要小心不要取到中间的膜和下面的液体。
直接加NaOH溶液与提取液混合搅拌,然后离心
就...
trizol法提
取
RNA
时
如何
去除基因组
DNA
在哪一步加NDA消化酶
答:
在
trizol
里加入三氯甲烷震荡离心后,取上头的水层,只要水层取得干净,没有沾染下头的东西,一般就不会有
DNA污染
,提取出来蛮干净的。
Trizol
提取
RNA
答:
造成
DNA污染
的原因主要
是Trizol
加入氯仿时混匀力度不够,造成DNA未被完全萃取。建议氯仿和
trizol
混匀时加大震荡力度。2.蛋白质污染 吸取上清时吸取的上清过多,中间层的蛋白质。造成最后的蛋白质污染。严重影响提取
RNA的
纯度。其实现在提取RNA,建议不要用Trizol。Trizol虽然是最经典的方法,但也存在着有机...
用
trizol法提
取
RNA
时,要
如何
才能防止空气中RNA酶
的污染
,所用一切物品...
答:
Trizol
本身就有一定保护
RNA的
作用,在研磨时,器具要用酒精棉消毒,研钵灭菌,研钵要预冷,保证液氮挥发干的时间不能太长,十秒左右就是极限了。Trizol量要足够100~200mg的组织量1mlTrizol就好,视组织类型和状态酌情补加,溶化后形成的液体要澄清,以没有肉眼可见的碎屑为宜。Trizol溶化后要及时收取,...
trizol法提
取
RNA
时
如何
去除基因组
DNA
在哪一步加NDA消化酶,
谢谢
!
答:
trizol
法
是RNA
,
DNA
提取的,在分层的时候,看你去哪一层了。分层后, RNA是在水相,而DNA是在中间的酚-氯仿层。“一般在加入溶解细胞剂,充分 溶解细胞后”这个方法是不可行的,这样的话,DNA酶都失活了。你提出RNA后,可以使用RNA miniprep试剂盒中的柱子,加样到柱子上。DNA酶的消化可以在柱子...
RNA
提取过程中
如何
去除
DNA污染
答:
离心取上清的时候,一定要小心不要取到中间的膜和下面的液体,如果已经
污染DNA
了,可以加无
RNA
酶
的DNA
酶,37度作用一小时就能去除了。
RNA
提取(
Trizol
法)
答:
细胞提取</: 单层培养细胞收集时,不论是直接裂解还是胰蛋白酶处理,都需注意细胞数量和
TRIZOL
添加量,避免
DNA污染
。分离过程样品匀浆后,室温静置5分钟,促进核酸与蛋白的彻底分离。可选步骤:4°C离心去除杂质,如大量蛋白、脂肪等。上清
中的RNA
将用于下一步操作。加入氯仿,震荡混合,离心分离,RNA沉淀...
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