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简述DNA重组技术的基本步骤,并列举出三种常用的基因载体!
如题所述
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推荐答案 2010-12-11
获得载体,提取目的基因片段,将目的基因片段连到载体上获得重组DNA,将重组DNA导入到宿主细胞中。
常用载体有质粒(一般克隆10bp左右的DNA片段)、噬菌体(与质粒相比,噬菌体可以克隆较大的DNA片段,噬菌体M13可以使DNA以单链形式被提取出来)、黏粒(可以克隆45bp左右的DNA片段)。另外还有BAC即细菌人工染色体和YAC即酵母人工染色体等。
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简述
利用
DNA重组技术
在大肠杆菌细胞中克隆外源
基因的基本过程
?
答:
载体准备:选择适当的载体,常用的是质粒(plasmid)
。质粒是环状的DNA分子,可以在细菌细胞中自主复制。将质粒进行线性化处理,通常通过酶切。DNA连接:将外源基因片段与质粒进行连接。此步骤需要使用DNA连接酶(如DNA ligase)和连接缓冲液,在适当的条件下将两者连接起来。连接通常是通过共有的限制酶切位...
基因工程常用的载体
?
答:
在基因工程重组DNA技术中将DNA片段(目的基因)转移至受体细胞的一种能自我复制的DNA分子。
三种常用的载体是质粒、λ噬菌体的衍生物和动植物病毒
,最常用的是质粒。用途:在基因操作过程中使用运载体有两个用途:一是用它作为运载工具,将目的基因转移到宿主细胞中去;二是利用它在宿主细胞内对目的基因进行...
重组dna技术
包括哪些
主要步骤
答:
重组DNA技术主要包括四个步骤:
提取目的基因、目的基因与运载体结合、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测和表达
。1、提取目的基因 获取目的基因主要有两条途径:一条是从供体细胞的DNA中直接分离基因;另一条是人工合成基因。直接分离基因最常用的方法是“鸟枪法”,又叫“散弹射击法”。2、目的基因与...
基因
克隆
的基本步骤
有哪些
答:
基因
克隆
的基本步骤
流程如下:一、目的
DNA
片段的获得:DNA克隆的第一步是获得包含目的基因在内的一群DNA分子,这些DNA分子或来自于目的生物基因组DNA或来自目的细胞mRNA逆转录合成的双链 cDNA分子。由于基因组DNA较大,不利于克隆,因此有必要将其处理成适合克隆的DNA小片段
,常用的
方法有机械切割和核酸限制...
载体的
类型 进来了解了解
答:
1、噬菌体载体。2、柯斯
质粒
载体。3、质粒载 pBR322。4、载体(Vector) ,指在基因工程重组DNA技术中将DNA片段(目的基因)转移至受体细胞的一种能自我复制的DNA分子。三种最常用的载体是细菌质粒、噬菌体和动植物病毒。在实际生活中,胰岛素就可以通过使用载体将已插入胰岛素基因片段的质粒放入大肠杆菌内...
重组DNA技术
中最
常用的
运载目的
基因的载体
是什么?
答:
目前常用的运载体主要有两类:一类是
质粒
,它是存在于细菌或酵母菌细胞质中的一类小型环状DNA分子,结构简单,独立于染色体或拟核之外,具有自我复制能力.另一类是病毒,包括植物病毒 动物病毒 噬菌体.目前最常用的运载体是细菌的质粒.目前最常用的运载体是细菌的质粒.质粒是最常用的 谢谢!
重组DNA技术
是如何操作的?
答:
重组DNA技术
一般包括以下几步:获得目的
基因
;与克隆
载体
连接,形成新的重组DNA分子;用重组DNA分子转化受体细胞,并能在受体细胞中复制和遗传;对转化子筛选和鉴定;对获得外源基因的细胞或生物体通过培养,获得所需的遗传性状或表达出所需要的产物。在具体工作中选择哪条技术路线主要取决于基因的来源、基因本身...
简述DNA重组
与分子克隆化
基本
原理与
过程
答:
1)足量的载体DNA,以满足j:i>1和j:i<3。对一个职pUC18一般大小的
质粒
,这意味着连接反应中应含有载体DNA为20-60μg/ml。 2)末端浓度等于或稍高于载体DNA的外源DNA,如外源DNA浓度比载体低得多,在效连接产物的数量会很低,这样就很难别小部分带重组抽粒的转化菌落。这种情况下,可考虑采用一些步骤来减少带非...
基因重组技术的基本过程
答:
①从基因文库中获取(基因组文库,部分基因文库)②利用PCR技术扩增目的基因(变性,复性,延伸)③通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成 2.基因表达
载体的
构建(
基因工程的
核心)基因表达载体的组成:目的基因、启动子、终止子、标记基因 3.将目的基因导入受体细胞 4.目的
基因的
检测与鉴定 ...
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