双酶切的20μL反应体系和反应时间如何确定？最好是说明原理。所用的酶都是Takara公司的

如题所述

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第1个回答 2011-06-16

模板DNA 几百ng-几ug，区别不大
酶1 0.5ul
酶2 0.5ul
buffer 去Takara产品目录查双酶切buffer表，按照那个倍数加，有时候需要BSA
水补足 20ul
30或37度，1-5小时都可以。有个别酶需要55度。

注意，酶别加多了，甘油浓度过高影响酶的活性。反应体系中甘油浓度要小于1%，而酶是储存在50%甘油中。本回答被提问者采纳

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