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Hind III 和Sal I双酶切反应体系
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第1个回答 2009-06-06
以20微升体系为例
方法一
Buffer Tango™ 4微升
HindIII 1 微升
SalI 1 微升
Incubate at 37°C 2-3小时
方法二
Buffer R 2
HindIII 0.6
SalI 2.4
Incubate at 37°C 2-3小时
注意：最好用第一种方法，效果更好本回答被提问者采纳
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某质粒上有
SalI
、
HindIII
、BamHI三种限制
酶
切割位点,同时还含有抗四环素...
答：
（1）将含有目的基因的DNA与质粒分别用Sa1I
酶切
，用DNA连接酶催化连接，两个DNA片段的连接结果有3种，目的基因自身连接、质粒自身连接和重组质粒．（2）只要Sa1
I酶
切割含有目的基因的DNA与质粒，形成相同的黏性末端，容易发生自身连接和反向接入；
HindIII
会破坏目的基因；则在构建重组质粒时，应选用
SalI
...
双酶切体系
一般怎么优化
答：
所采用内切酶组合最好根据生物体自身特点来决定:一般G+C含量较高的基因组,选择识别位点富含G+C的内切酶组合,如ApaⅠ(GGGCC/C)-TaqⅠ(T/CGA);相反,低G+C 含量的基因组,选择识别位点富含AT的内切酶组合,如EcoRⅠ(G/AATTC)(T/TAA);
Hind
Ⅲ(A/AGCTT)适合于G+C含量为40%~50%的基因组DNA的
酶切
。在我们...
双酶切
时,是直接用pcr产物就可以,还是需要
答：
在进行PCR扩增时候，给引物两端设计好酶切位点，一般说来，限制酶的 选择非常重要，尽量选择粘端酶切和 那些酶切效率高的限制酶，如BamHI，
HindIII
，提前看好各公司的
双切
酶所用公用的BUFFER，以及各酶在公用BUFFER里的效率。选好酶切位点后，在各个酶的两边加上保护碱基。
双酶切
时间及其
体系
：需要...
某质粒上有
SalI
、
Hind
m、BamHI三种限制
酶
切割位点,同时还含有抗四环素...
答：
用该
酶
切割会破坏目的基因；若只用
SalI
一种限制酶切割可能会导致目的基因与运载体反向连接；因此在构建重组质粒时，应选用SalI和
HindIII
两种限制酶对质粒和抗盐基因进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性．（4）用SalI和HindIII两种限制酶对质粒进行切割时，会破会四环素抗性基因，但不会破坏氨苄青霉素抗性...
...利用质粒(有抗四环素基因、抗氨苄青霉素基因
和Sa
答：
若只用
SalI
一种限制
酶
切割可能会导致目的基因与运载体反向连接；因此在构建重组质粒时，应选用SalI和
HindIII
两种限制酶对质粒和抗盐基因进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性．故答案为：（1）基因重组 PCR （2）复制 （3）抗盐基因 （4）Sal I和
Hind III
含抗盐基因的DNA ...
HindIII
、Xho
I双酶切
答：
这样且可能不能全部切开，如果只是鉴定的话可以，但要是用于连接就会有大量的假阳性。你可以考虑先用一种
酶切
，回收后换另一种酶切，都是用最适Buffer，效果应该会好一些
HindIII和
EcoRI双酶切用NEB哪个缓冲液,还有BamHI 和
HindIII双酶切
用哪...
答：
推荐的是buffer 3.1，但是这个buffer这两个
酶
都没带，而且因为在3.1中貌似活性都只有50%左右，所以酶的用量得增加，而且时间得加长。如果实在不行，就分别切好了。网页上表格看得比较清楚（https://www.neb.com/tools-and-resources/interactive-tools/double-digest-finder?enzyme1={2F6573A8-32BE...
双酶切
老是切不完全
答：
首先，你看你的载体片段和目标片段的亮度比是不是大约10倍（因为一般T载体大小在2.5K~3k左右），如果是的话，那是正常现象。如果你能看见线性化的载体或没有切开的载体，那么建议你换一下新开封的
酶
试试。
hindIII
xhoI做
双酶切
大概要切多长时间?
答：
2小时足矣
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