提质粒步骤

Question

如题所述

Answer 1

质粒提取主要包括三个步骤：

1、菌体扩繁。

2、菌体裂解释放质粒DNA。

3、质粒DNA的分离与纯化。

质粒提取办法中，最常用的是碱裂解法，它具有得率高，适用面广，快速，纯度高等特色。

其原理是：强碱（pH12.0-12.6）环境下，SDS损坏细胞壁并裂解细胞，一同使宿主细胞的蛋白质、染色体及DNA发生变性，而质粒DNA因为其分子量小而缠结严密不易变性。

pH调至中性时可恢复天然构象，在高盐条件下，细胞碎片、变性的蛋白质和染色体DNA发生沉积，离心后可去除。

上清中的质粒DNA可经过乙醇沉积或许硅胶膜特异性吸附等方法，将质粒DNA从上清中回收。