HRP标记抗体的方法：
根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结合物，可用戊二醛二步法和过碘酸钠法。尤以简易过碘酸钠法更为常用。
戊二醛二步法原理:
戊二醛为一种双功能试剂，通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白结合物。
在不断搅拌下，每升滤液中慢慢加入226克硫酸铵粉末（相当于0.40饱和度），大约在1~2小时内加完，置冷室中放置过夜。次日将上清液小心地用虹吸管移出，下面浑浊液以3000转/分离心15分钟，弃沉淀，合并上清液。
再按每升上清液加258克硫酸铵粉末（0.8饱和度）随加随搅拌，当硫酸铵全部溶解后，置冷室过夜。次日，虹吸出上清液，沉淀部分在冰冻离心机中以13000转/分离心20分钟，弃去上清液，收集沉淀。
扩展资料：
1、 8mg辣根过氧化物酶放入1ml玻璃瓶，加入1ml双蒸水溶解，液体呈棕色。
2、放入一个磁力搅拌子，电磁搅拌同时逐滴缓缓加入新配制的NaIO40.2ml，室温下继续搅拌40min，液体呈现草绿色。
3、将全部溶液用滴管装入反复用去离子水冲洗的透析袋中，4oC对1 mMpH4.4的NaAc透析过夜，中间换液3－4次，每次300ml，溶液最终呈浅棕色。
4、按照酶：抗体＝1：1的比例准备抗体，抗体浓度不小于2mg/ml。
5、对0.01MNa2CO3透析过夜，中间换液3－4次。
6、将透析好的HRP溶液（浅棕色）装入玻璃瓶，加入0.2MNa2CO3溶液将pH调整至9.0，混匀后立即加入透析好的抗体，边加边用电磁搅拌器搅拌。
7、MNa2CO3溶液将HRP/抗体混合物的pH调整至9.0（9-10之间就可以），室温继续搅拌3hr。
8、入新配制的硼氢化钠溶液100ul，4oC放置2hr。
9、4oC，1×PBS中充分透析，每2hr换液一次，共换4次。
参考资料来源：