成功提取mRNA，最关键的问题是什么，为什么?用从总RNA中分离mRNA的原理是什么?

Question

如题所述

Answer 1

【答案】：成功提取mRNA，最关键的问题是抑制RNA酶活性。因为mRNA呈单链状，容易受到核酸酶的攻击。
异硫氰酸胍法(TriZol)原理：TRIZOL试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚，其中异硫氰酸胍可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯仿时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA，有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。[考点]总RNA中分离mRNA的原理。细胞中的总RNA包括mRNA、rRNA、tRNA以及一些小RNA(sRNA)。完整RNA的提取，是进行RNA方面的研究工作的前提。所有RNA的提取过程中都有五个关键点，即(1)样品细胞或组织的有效破碎；(2)有效地使核蛋白复合体变性；(3)对内源RNA酶的有效抑制；(4)有效地将RNA从DNA和蛋白混合物中分离；(5)对于多糖含量高的样品还牵涉到多糖杂质的有效除去。但其中最关键的是抑制RNA酶活性。
总RNA提取的方法有多种，主要有LiCl法、CTAB法、异硫氰酸胍法(TriZol)。