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wb内参用什么稀释
如题所述
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推荐答案 2023-12-17
稀释液。使用与目的蛋白相同的稀释液进行稀释，是WB法非常重要而必须的部分，这是为了确保蛋白上样的量和目的蛋白分子量之间的线性关系，以此为基础确定标准品稀释度，用于定量测定蛋白样品中目的蛋白的浓度。
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wb
中一抗和
内参
怎么加的
答：
按照所用抗体说明书，
用TBST按说明书建议比例稀释一抗进行孵育
，因抗体都很珍贵，一般用量在稀释后2-5毫升即可，用封膜机进行封膜孵育。原理：与Southern Blot或Northern Blot杂交方法类似，但Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAG...
westernblot
内参
GAPDH成功了
答：
过硫酸铵（AP），给我的是一支0.5g干粉，说明书说配成10%溶液，我先是拿1mlDDW
稀释
，然后去了100ul在稀释成1ml。结果依据产品说明书的要求配置分离胶，过了一个消失还是不能凝固。多方求教之后才发现AP，只有5%（Oh，my god！）。于是再取了100ul加入AP溶液中，这下就解决问题。 在配胶过程中...
分子量较大的蛋白怎么做
wb
实验
答：
合适的内参印染，
一般用的比较多的几种内参分子量都比较小（30~50KD）合适的凝胶，胶浓度要配制的稀一些
，一般选择3%~10%的凝胶 增加转膜时间，分子量较大的蛋白要完全转到膜上需要更长的时间
做好westernblot需要注意各种细节,转给需要的你!
答：
1×TBST洗液:使用时将100×TBST用双蒸水稀释至1×
,常温保存。 Little Trick 1.关于电转膜,有些使用NC膜。我没有尝试过NC膜,但隔壁实验室使用NC膜多次WB结果仍不理想,换用PVDF膜后有所改善。因此建议还是使用PVDF膜,可购买Millipore的PVDF膜,一卷有些贵,但是可以够一个实验室用好几年哪。最好不要在经销商购...
WB
蛋白电泳实验步骤,液体的配置及相关问题解答
答：
深入探讨
WB
蛋白电泳实验：步骤详解与常见问题解答 Western Blot，简称WB蛋白印迹法，是科研领域中不可或缺的实验手段。以下是一份详细的电泳液配置和实验步骤，以及常见问题的解答，希望对您的实验工作提供有力支持。1. 试剂配置与选择电泳液: 以100ml为基准，准备Tris 3.03g, 甘氨酸 18.8g, SDS 1g。
内参
配制方法
答：
在
WB
中
使用内参
其实就是在WB过程中的另外用内参对应的抗体检测内参，这样在检测目的产物的同时可以检测内参的表达，由于内参在各组织和细胞中的表达相对恒定，借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差，这样半定量的结果才更为可信。此外使用内参可以作为空白对照，检测蛋白转膜情况是否*、整个WB显色...
我是
WB
新手。目的分子量180.应该
用什么内参
,分离胶的浓度选多少?请高手...
答：
分子量180，有点大啊，可以试试6%分离胶
内参
我们用的是GAPDH，你可以参考
【求助】
WB
上样量应为多少?
答：
通常我上50-100ug，足够了。如果蛋白浓度太高导致上样过小，可用裂解液
稀释
蛋白使总上样体积在10ul即可，勿用水稀释会改变PH值。上样不要过高，否则条带兜一大坨，不好看。具体还得在试验后确定，如果
内参
出来，目的蛋白不出来，可能表明目的蛋白丰度低，上样量相对不足可在增加上样量试试。当然目的...
WB
相关技巧--quantity one软件调节
内参
答：
1.跑
WB
有时候不想做PCA定量怎么调节
内参
呢？ 解答：有老司机认为凭借经验可以用肉眼看出来差异，可是对于新手来说总不能做个几百次才像他们获得经验吧，这时候定量就是急需的内容了，对不对？ 解决方法呢？ 一般可以用image J 软件或者quantity one软件进行操作， 原理为 ：image J ...
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