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实际工作中,western blot电泳条带总是歪斜不整齐原因?
如题所述
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推荐答案 2017-11-12
胶没有配好~可能是成分不对比如pH~也可能是凝的时间不充分~浓缩胶的距离要充分~可以在样品两端加loading压道~
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http://www.wendadaohang.com/zd/An5G1AAnW4A5GdA14G.html
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western
问题。我的
电泳条带总是
两头翘,各种可能的
原因
都想过,像...
答:
可以调低电压,避免跑胶过快,凝胶过热,看有没有改善
。有时候缓冲液反复使用太多次也会出现这种情况,应该及时更换缓冲液。
western
blot
跑不出
条带,是
什么
原因
啊?
答:
转膜的问题,膜和胶之间有气泡等
。Westernblot法即是一种将电泳与KIJSA结合起来的技术,可分为电泳、转印、酶免疫测定3个阶段。Westernblot法结合了电泳的高分辨率和酶免疫测定的高敏感性和特异性,是一种能用于分析样本组分的免疫学测定方法。生物大分子印迹法实际上是凝胶电泳技术、固定化技术及分子亲和...
Western
blot
实验内参蛋白跑出来了,目的蛋白没有
条带是
怎么回事?
答:
实验条件的偏差:电泳时间、蛋白转移、抗体反应等环节的细微变化都可能导致问题
。
如电泳不足,分离不彻底;转移条件不合适
,影响后续反应的精度。为解决这一困境,我们需采取以下策略:精挑内参蛋白:确保选择的内参蛋白稳定且表达水平接近目标蛋白。如果必要,可以尝试调整实验参数,如调整抗体浓度或反应时间,...
为什么
western
blot 及southern
blot电泳
后都要转膜?
答:
而其他的
条带不
显示(比如
western
的抗原抗体标记,southern的放射性自显影)。这种标记必须在膜上进行,不能直接在胶上进行,所以
电泳
后必须转膜。如果不转膜,也可以直接把胶染色,把所有的条带都染出来(比如考染,银染)。但这种实验就不叫western了。western、southern都特指标记法。
在
western
blot
中loading buffer的作用是什么?
答:
1、指示剂,方便观察
电泳
进行的程度;2、密度大,携带你的样本沉到孔的底部;3、保持蛋白线性及携带过量负电荷的状态。除此之外,里面最重要的是还有巯基乙醇还原剂来让蛋白质充分变性,同时保护-sh基团。
western
blot
试验中蛋白转膜
总是
颜色很浅... 分子量是27KD,电流和电压...
答:
(2)在转膜过程中,特别是高电流快速转膜时,通常会有非常严重的发热现象,最好把转膜槽放置在冰浴中进行转膜。(3)转膜的效果可以观察所使用的预染蛋白质分子量标准,通常分子量最大的1-2
条带
较难全部转到膜上。转膜的效果也可以用丽春红染色液对膜进行染色,以观察实际的转膜效果。也可以用考马斯...
westernblot电泳
后,为什么要考马斯亮蓝染色,直接转膜不行吗?谢谢!
答:
WB的胶用考马斯亮蓝染色,有为了确定你的目的
条带电泳
情况目的,还有一个目的,就是跟用丽春红染摸一样的作用,看转膜的效率。也就是看你的目的条带是否都转移到你的膜上了。这步染色完全可以省略,一般都可以用预染Marker来进行转膜观察,另外考马斯亮蓝与蛋白结合后,很难再去除。
hiv。是指什么病啊
??
具体一点?梅毒用什么代号表示。有什么证壮啊...
答:
为防止假阳性,可做
Western
blot
(WB,蛋白印迹法)进一步确证。 WB法是用聚丙烯酰胺凝胶
电泳
将HIV蛋白进行分离,再经传移电泳将不同蛋白
条带
转移于硝酸纤维膜上,加入病人血清孵育后,用抗人球蛋白酶标抗体染色,就能测出针对不同结构蛋白抗体,如抗gp120、gp41、P24抗体,特异性较高。 (二)抗原检测 用ELISA检测P24抗原...
跑
westernblot
时
电泳
时的
条带
呈斜行是咋回事
答:
跑
westernblot
时
电泳
时的
条带
呈斜行原因很多 主要可能是电泳凝胶配制时未搅拌均匀,造成条带未能直线跑完 电泳凝胶中混入气泡,造成条带被挤压倾斜 也可能是样品缓冲液有干扰,造成条带迁移率不统一 另外上样量过大,被其他泳道挤压也有可能
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western blot 原理
westernblot条带上标
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western blot一抗二抗
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