第1个回答 2013-08-17
我在做蛋白质分离纯化，其中一步用到乙醇沉淀，操作如下：
1、将蛋白质溶液和无水乙醇4摄氏度预冷；
2、调pH至目的蛋白的等电点（6.9）；
3、在磁力搅拌器的搅拌下缓缓加入冰冷的乙醇，乙醇终浓度为60%；
4、4℃静置30min后，离心、弃上清；
5、晾干沉淀、用pH8.0的Tris-HCl Buffer回溶。
问题是回溶时候十分难溶，即使好不容易将沉淀溶解了，溶液也是浑浊的，不澄清。请战友们分析一下会是什么原因啊？ 大家在这里讨论一下乙醇沉淀的有关技术吧，谢谢啦！
以胶体形式分散在溶液中的蛋白，被乙醇破坏水化膜后而沉淀，部分蛋白可以复溶，这与具体的蛋白组分有关，也与你操作方式有关，如乙醇的浓度、温度、沉淀时间等。
沉淀不溶解并不是异常现象，我个人理解这正是实验所需要的，经过复溶后可以将不溶解的蛋白进行分离，这难道不是你要的结果吗？关键是你的目标蛋白是在那个组分中，如果是在不溶解组分中，可能需要调整你的实验方法，详细分析乙醇浓度与蛋白沉淀的关系。
回：shijs老师——
我在调节蛋白质溶液的等电点时发现蛋白质溶液的pH从8.0调至6.9的过程中，伴随着HCl的加入，有明显的沉淀产生，我想是不是这些沉淀导致了最后的回溶效果不好？于是我调完等电点之后，就把我的蛋白质溶液离心了，离心沉淀就是加酸过程中产生的沉淀，我将这些沉淀用Buffer回溶，发现的确是非常难溶，即使溶解了也是白茫茫的十分浑浊。难道是酸变性？有什麽办法解决之吗？