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GFP融合蛋白怎么构建 来进行亚细胞定位呢？
如题所述
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推荐答案 2012-01-11
需要有设计引物的相关知识和相关载体。以及你的目的基因和GFP基因。
温馨提示：答案为网友推荐，仅供参考
当前网址：
http://www.wendadaohang.com/zd/K313GAA1d.html
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【小远答疑】
亚细胞定位
常见问题
答：
1.
融合
位置的秘密: 在
构建定位
载体时，选择荧光
蛋白
的N端还是C端融合至关重要。信号肽的存在可能影响定位，例如，荧光蛋白N端融合可能导致过氧化物酶体定位失败；而C端融合可能导致线粒体和质体定位受限。2. 物种差异的挑战: 同一载体在不同物种中的表现可能差异显著，受体材料的选择至关重要。为了获...
怎么亚细胞定位
分析
答：
用报告基因技术呀 比如说最常用的绿色荧光
蛋白GFP
或者改造过的EGFP等.和目的基因
构建
成为
融合蛋白
,转入细胞中以后,用激光扫描共聚焦显微镜就可以观察到基因的
亚细胞定位
亚细胞定位
时,目的基因的
蛋白
和
GFP融合?
用去除终止密码子吗
?怎么
去除...
答：
亚细胞定位
时，GFP蛋白是指示蛋白，你的目的蛋白和
GFP蛋白融合
到一起，显示荧光的部位便是你目的蛋白定位的部位，所以要保证两个蛋白融合为一条肽链，那么就一定要去掉目的蛋白的终止子，否则使翻译提前终止，不能使它们连接为一条肽链。去掉的方法就是设计PCR引物的时候引物不要包括终止密码子即可。融合...
亚细胞定位
问题
答：
亚细胞定位
不是研究某个基因的表达量，而是研究该基因在细胞中的位置。在目的
蛋白
末端连接绿色荧光蛋白就可以在荧光显微镜下直接观察该蛋白所处的位置。RT-PCR只能分析RNA的表达量，不能确定该RNA翻译的蛋白位于细胞的哪个位置。
原生质体
gfp亚细胞定位
加多少报告质粒
答：
目前
进行亚细胞定位
研究，提取拟南芥(Arabidopsis thaliana)(Arabidopsis thaliana)叶肉原生质体进行PEG转化。研究目标采用
GFP
/YFP
融合蛋白
，但是在LSM710观察时，叶绿体有很明显的背景，尽管有些细胞是明显看到了GFP荧光，远远强于叶绿体背景，但是拍的照片只看得出叶绿体的形状。细胞器marker选择了mCherry，是参考...
基因枪
亚细胞定位
可以维持多久
答：
为明确已知基因产物在细胞中的表达位置，如转录因子一般在细胞核内表达，就要做基因表达的
亚细胞定位
。一般方法是将目标基因与
GFP
（绿色荧光蛋白）
构建融合蛋白
表达载体，然后通过基因枪的方法将载体转入洋葱表皮细胞中，在利用荧光显微镜观察绿色荧光在细胞中的位置。因为洋葱表皮细胞较大，容易观察表达部位。
如何
分析
蛋白质
的
亚细胞定位
答：
不同物种，不同基因家族成员有可能有区别。最终还是需要实验来验证的。功能基因研究中，经常会进行基因编码的蛋白质的
亚细胞定位
的，如待定位蛋白和
GFP
、YFP、RFP等融合后，观察
融合蛋白
在细胞内的定位，或者将预测部位（如该蛋白可能在液泡膜上）的蛋白提取出来，进行western实验，来验证等。
植物
亚细胞定位怎么
选择载体
答：
一般来说，常见的植物
亚细胞定位
载体包括
GFP
、DsRed、mCherry等。其中，GFP是一种绿色荧光
蛋白
，用于标记细胞或亚细胞结构； DsRed和mCherry是红色荧光蛋白，适用于单细胞或组织水平的染色。在选择载体时还应该考虑到质粒大小、表达稳定性、转化效率等因素。在选择植物亚细胞定位载体时，需要针对具体的研究目的...
为了更好研究HD1基因的
亚细胞定位
,我们
构建
了含有35s启动子:HD1-
GFP
的...
答：
这是动物还是植物
细胞
工程？看起来像植物，双元载体的话，质粒应该比较大，应该不是打基因枪或是原生质体了，一般是用农杆菌侵染烟草表皮瞬时转化吧。有很多protocol，我就提供一份我用过的吧：1 载体转化入农杆菌；2 工程菌单克隆于YEB培养基 28℃，过夜培养；3. 1%扩大培养于新培养基（YEB+100uM ...
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