IMViC试验是什么,由哪几个试验

IMViC试验是什么,具体有哪几个试验

IMViC试验是数个试验的集合。在微生物实验室中,时常用来鉴定大肠菌群(Coliform bacteria)。

一、吲哚试验

在本试验中,我们将欲鉴定的微生物放到蛋白胨液态培养基(peptone water broth)中。该培养基含有色胺酸(tryptophan),可被色胺酸酶转变成吲哚,氨和丙酮酸

接着吲哚可以用二甲苯萃取出来。欲测试液态培养基中是否有吲哚产生,在培养细菌24小时后,我们加入柯瓦克试剂(Kovac' reagent),若在液体表面出现一层(粉)红色,这是阳性结果,表示有吲哚存在。

二、甲基红

甲基红(MR)试验

检测细菌能 否分解葡萄糖产生有机酸的能力。当细菌代谢糖产生有机酸时,使加入培养基中的甲基红指示剂由橘黄色(pH 6.3)变为红色(pH4.2),即甲基红反应。

例如,大肠杆菌先发酵葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸再被分解为有机酸(甲酸、乙酸、乳酸琥珀酸等),由于产酸量较多,使培养基的pH降至4.2以下,此时加入甲基红指示剂呈红色,为阳性反应;而产气肠杆菌分解葡萄糖产生有机酸量少;

或产生的有机酸又进一步转化为非酸性末端产物(如醇、醛、酮、气体和水等) ,使pH升至大约6.0,此时加入甲基红指示剂呈黄色,为阴性反应。

某些细菌在糖代谢过程中,分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸进一步被分解成为甲酸、乙酸、琥珀酸等,使培养基pH下降至4.5以下,加入甲基红指示剂可呈红色。

如细菌分解葡萄糖产酸量少,或产生的酸进一步转化为其他物质(如醇、醛、酮、气体和水),培养基pH在5.4以上,加入甲基红指示剂呈橘黄色。本试验常与V-P试验一起使用,因为前者呈阳性的细菌,后者通常为阴性。

三、V-P试验

用于检测细菌能否利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力。某些细菌,如产气肠杆菌分解葡萄糖产生的丙酮酸又进行缩合、脱羧生成乙酰甲基甲醇(3 -羟基丁酮) ,此化合物在碱性条件下易被空气中的氧气氧化成二乙酰(丁二酮),二乙酰与培养基蛋白胨中精氨酸的胍基作用;

生成红色化合物,即V - P试验阳性反应;而大肠杆菌不产生红色化合物,为阴性反应。若在培养基中加人α-紫酚或少量肌酸(0.3%)、肌酐等含胍基的化合物,可加速此反应。

四、柠檬酸盐利用试验

本测试使用西蒙柠檬酸琼脂(Simmon's citrate agar),检测该微生物可否只用柠檬酸盐作为其唯一碳源。该琼脂含有柠檬酸盐、胺盐(作为氮源)和溴麝香草酚蓝(bromothymol blue)作为指示剂。在种菌以前,西蒙柠檬酸琼脂是绿色的;若柠檬酸盐被利用了(阳性),将转为蓝色。

扩展资料:

大肠菌群是革兰氏阴性菌,是好氧或兼性厌氧杆菌,会发酵乳糖并在48小时内产生气体。食物中若存在一些大肠菌群表示该食物受到粪便污染。

"IMViC"中每一个英文字母各代表了一种试验。"I"代表吲哚(indole)试验;"M"代表甲基红(methyl red)试验;"V"代表伏普(Voges Proskauer)试验;

"C"代表柠檬酸盐利用(citrate utilization)试验。小写字母"i"只是代表in:柠檬酸盐利用试验中我们会把大肠菌群放到柠檬酸盐中(place "in Citrate")。

这些试验方便我们鉴定肠杆菌科(Enterobacteriaceae)。

温馨提示:答案为网友推荐,仅供参考
第1个回答  推荐于2017-05-21

    I→吲哚试验

  原理

  某些细菌有色氨酸酶,能分解蛋白胨中的色氨酸形成吲哚(靛基质),吲哚能与对二甲基氨基苯甲醛作用生成玫瑰吲哚而呈红色。

  实验方法

  试剂盒法:将对二甲基氨基苯甲醛加入细菌蛋白胨水培养液中。(注:不能摇晃试剂盒)

  试管法:以接种环将待检菌新鲜斜面培养物接种于Dunham氏蛋白胨水溶液中,置37℃培养24~48h(可延长4~5d);于培养液中加入戊醇或二甲苯2~3mL,摇匀,静置片刻后,沿试管壁加入Ehrlich氏或Kovac氏试剂2mL。

  斑点试验法:将一片滤纸放在培养皿的盖子上或一张载玻片上,滴加1~1.5mL试剂液于滤纸上使其变湿,取18~24h琼脂平板培养物涂布于浸湿的滤纸上,在1~3min内观察。

  试验结果

  试剂盒法:呈红色反应,形成玫瑰吲哚,为吲哚试验阳性。不出现红色则为阴性。

  试管法:出现红色颜色变化为阳性。不出现红色则为阴性。

  斑点试验法:棕色的试剂由紫红变为红色者即为阳性。

    M→甲基红(MR)试验

  原理

  某些细菌在糖代谢过程中,分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸进一步被分解成为甲酸、乙酸、琥珀酸等,使培养基pH下降至4.5以下,加入甲基红指示剂可呈红色。如细菌分解葡萄糖产酸量少,或产生的酸进一步转化为其他物质(如醇、醛、酮、气体和水),培养基pH在5.4以上,加入甲基红指示剂呈橘黄色。本试验常与V-P试验一起使用,因为前者呈阳性的细菌,后者通常为阴性。

  试验方法

  取一种细菌的24h培养物,接种于葡萄糖蛋白胨水培养基中,置37℃培养48~72h,取出后加甲基红试剂(甲基红0.02g,95%酒精60mL,蒸馏水40mL)3~5滴,立即观察结果。如果培养液呈红色者为阳性,橙色者为可疑,黄色者为阴性。

  试验结果

  培养液呈红色者为阳性,橙色者为可疑,黄色者为阴性。

    V→二乙酰(V-P)试验

  原理

  某些细菌能发生如下转换:葡萄糖→丙酮酸(脱羧)→乙酰甲基甲醇(Acetymethyl carbinol)→2,3—丁烯二醇(2,3—bytaylene cylycol),在有碱存在时氧化成二乙酰,后者和胨中的胍基化合物起作用产生粉红色的化合物。本试验目的在于测定细菌产生乙酰甲基甲醇的能力。大肠埃希菌与产气肠杆菌均能分解葡萄糖,产酸产气,为区分两菌可采用V-P试验及甲基红试验。

  试验方法

  O’Meara’s法:将被检细菌接种于葡萄糖蛋白胨水培养基后,于35~37℃培养48h,于每毫升培养物中加入0.1mL试剂(40g KOH溶于100mL蒸馏水中,加入0.3g肌酐即成),猛烈摇振混合。

  Baritt’法:同上法接种培养细菌,于2mL培养液内加入甲液(6%α-萘酚酒精溶液)1mL和乙液(40% KOH)0.4mL,摇振混合。

  试验结果

  试验时强阳性者约于5min后,可产生粉红色反应。如长时间无反应,置室温过夜,次日不变者为阴性。

  

     C→枸橼酸盐利用试验

  原理

  当细菌利用铵盐作为唯一氮源,并利用枸橼酸盐作为唯一碳源时,若细菌能利用这些盐作为氮源和碳源而生长,则能利用枸橼酸钠产生碳酸盐,从而与利用铵盐产生的氨反应,形成NH4OH,使培养基呈碱性,使指示剂溴麝香草酚蓝(BTB)由淡绿转为深蓝。

  试验方法

  Simmons氏培养基法:将被检细菌少量接种到培养基中,37℃培养2~4d,观察培养基颜色变化。

  Christenten氏培养基法:将被检细菌少量接种到培养基中,接种时先划线后穿刺,孵育于37℃观察7d,观察培养基颜色变化。

  实验结果

  Simmons氏培养基法:培养基变蓝色,阳性;不变,阴性。

  Christenten氏培养基法:培养基变红色,阳性;不变(黄色),阴性。


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第2个回答  2012-05-29
IMViC试验 用于鉴别细菌种类,吲哚(I)、甲基红(M)、VP(V)、枸橼酸盐利用(C)四种试验合称IMViC试验
第3个回答  2012-02-11
乳糖胆盐用九管发酵法:1、初发酵:选择三个稀释梯度,每个稀释度各注三管结果产酸产气的进行复发酵试验:方法雷同,用乳糖胆盐复发酵培养基。复发酵
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