dh5α感受态细胞不表达自身的质粒吗?扩增质粒后提取质粒的时候会不会把大肠杆菌自身的质粒也提取出来

如题所述

你好!dh5α感受态细胞是常用的细菌质粒扩增提取细菌,其本身是含有质粒的。普通的大肠杆菌细胞内有一种“免疫”机制,即当外源DNA 侵入时,会产生酶类将外源DNA切除,无法进行复制增殖。而其自身质粒的基因组被修饰(如甲基化)所以不被限制酶识别,不会被剪切。DH5α菌株是一种经诱变的菌株,其基本特性是:缺乏自身DNA 修饰,缺乏“免疫”机制,不会对导入的外源DNA切割,并对氨苄青霉素敏感。因此DH5α用于质粒扩增时候,其自身的质粒不会被扩增,而外援质粒同样不会被切割,因此可以用于基因工程追问

非常感谢您的回答 我还有一个问题 我们提取质粒的时候 会不会把大肠杆菌自身的dna也提取出来 从而造成质粒污染呢

追答

很多科研都是用的DH5α扩增的质粒,一般外源加入的质粒都是加入氨苄抗性的,我们筛选的时候会加入氨苄,这样就会杀死没有导入外源质粒的细菌,而导入外源质粒的细菌则可以生长繁殖。

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第1个回答  2017-12-29
对,它不表达自身质粒,因为培养基里有抗生素,只有携带抗生素基因的质粒(也就是我们转化到感受态里的质粒)才能表达,所以长出来的全都是含抗生素基因质粒的菌。所以提取出来的质粒肯定全都是我们转入要克隆的重组质粒。追问

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