故事从一个寒冷的雪夜开始。 年幼的女孩优姬在漫天大雪的月夜里迷了路，意外的撞上了那传说中的噩梦代名词——吸血鬼。 生死时刻，男主角之一——玖兰枢出现了。在吸血鬼即将下口之时，他用手臂挡下了，救下了女孩，并将她带到了黑主学园理事长那里，请求理事长的收留照顾。 十年过去了。当年的小女孩如今已是黑主学院普通班一年级的风纪委员。而当年救了优姬的久兰枢亦是黑主学院夜间部班长和社长，同时也是月之舍的舍长。 普通班在白天上课，夜间班则在夜晚上课，两个班轮流使用校舍；相互间唯一能产生交集的机会只有在傍晚两个班交换校舍的时候。 这样的安排是有其原因的。因为夜间班有一个不为人知的秘密，那就是，夜间班的所有成员，都是吸血鬼。而受人尊敬的玖兰学长，则更是被称为“吸血鬼中的吸血鬼”的纯血种吸血鬼。
吸血鬼一族都是以幽雅，秀美，才华出众的人类形态出现在世间。于是这些美艳的吸血鬼少年，就成了普通班的少女们爱慕的对象。而每天傍晚的课时交替时分，就不可避免的出现女生们拥挤在学舍前等待吸血鬼少年们的情形。 人类与吸血鬼的接触，事件本身就有着不合适的理由。于是，优姬与另一位男主角——风纪委员锥生零担负起学院守护者的职责，处理人类学生与吸血鬼接触时所出现的麻烦。
零的家人在四年前被吸血鬼所杀害，而零却奇迹般的活了下来，并受到了理事长的收留照顾，在学院里上学。不幸的往事，使得零的性格变的异常冷酷。 对于救过自己性命的玖兰学长，优姬心中存着感激与仰慕；而对于身世孤苦的零，优姬有着长姐般的关怀与身世相怜的疼惜。另一方面，玖兰虽然对优姬有好感，但似乎迟疑于某种原因，不仅仅是种族间的鸿沟；而零虽对优姬也有感觉，但迟钝的情感与坚硬的内心却阻止了他的感情。 故事就是在这样的环境中展开。
黑主 优姬（黒主 优姫） 声优：堀江由衣
黒主 优姫女主角，黑主理事长之养女，同时也是黑主学园的风纪委员。
人类外表年龄：16
血型：O型
身高：152cm
武器：狩猎女神（Artemis）
女主角，5岁前的记忆全部丧失，在一个雪夜，遭到吸血鬼袭击时被玖兰枢所救，而后被玖兰枢带到理事长黑主灰阎家中抚养。记忆中的第一人是枢，又被枢所救，所以一直非常喜欢枢。现在是理事长的养女，性格开朗善良。与同样被理事长收养的猎人之子——锥生零一起，零作为黑主学院的风纪委员，守卫着学院里夜间部的秘密。
在她5岁的时候，她的母亲玖兰树里为了保护她，不让她被玖兰家的背叛者——玖兰李土抓走，用自己的生命封印了优姬作为吸血鬼的全部能力和记忆，使她作为一个人类得以生存下来。父亲玖兰悠在和李土的战斗中被李土用猎人的剑所杀。现在她已经觉醒吸血鬼的能力，知道了自己的真实身份—纯血种吸血鬼！她是玖兰家唯一的纯血公主，也是枢的亲妹妹—玖兰优姬！是作为枢的妻子而出生的。
对于零，希望能够守护着他，不让他受到伤害，但是变成吸血鬼后对于作为猎人的零有很深的愧疚感。
TV版里，最后与枢还有其他吸血鬼一起离开了黑主学园
https://gss0.baidu.com/70cFfyinKgQFm2e88IuM_a/baike/abpic/item/38403f3f386692cd54e723af.jpg 锥生 零（锥生 零） 声优：宫野真守
锥生 零学园守护者之一 年龄：17
生日：3月28日
血型：A型
身高：181cm
武器：血蔷薇之枪
在校成绩：天才般的优秀
擅长科目：理科
出生于吸血鬼猎人家族，沉默寡言，深爱着优姬，4年前父母被纯血种吸血鬼——绯樱闲杀害，虽然后来黑主理事长收养了他，但是锥生已经被绯樱闲咬伤，成为了人类吸血鬼，家人的死给他带来了巨大伤痛，自此他对吸血鬼深恶痛绝（特别是纯血种）。他是极少数的对血液药锭产生排斥的麻烦的吸血鬼，吃了之后会吐。所以一直在吸食优姬的血。在零吃了弟弟一缕，体内有三个纯种吸血鬼之血（玖兰优姬，玖兰枢，绯樱闲）的零变成了最强大的吸血鬼猎人。
https://gss0.baidu.com/70cFfyinKgQFm2e88IuM_a/baike/abpic/item/35e940df2dd62232495403ae.jpg 玖兰 枢（玖兰 枢） 声优：岸尾大辅）
人类外表年龄：18
身高：184cm
玖兰 枢高傲尊贵的纯血种，拥有强大能力，十年如一日地守护着优姬。在夜间部极有声望，是王者一样的存在，没有人敢违抗他的命令。10年前从吸血鬼的手中救出优姬的恩人。有时却也展现出腹黑的一面，但他所做的一切都是为了给优姬一个不用害怕也能生存下去的地方。平时总是很温柔的样子，但似乎也有冷酷的一面——他为了得到足够的力量而杀死了绯樱闲，因为他和绯樱闲有着一个共同的敌人，是把纯血种内部搅乱的罪魁祸首，也是所有纯血种的敌人，但他所做的一切也都是为了保护重要的亲妹妹-优姬。
他是玖兰家的始祖，但是是被杀害自己父母的玖兰李土唤醒的，所以身份上其实还是玖兰李土的“仆人”，所以纵使有深仇大恨，也不能将李土杀死。目前，已经用自己的血使优姬觉醒且恢复了记忆，恢复成了纯血吸血鬼。
TV版里，带着优姬和其他吸血鬼离开了黑主学园
https://gss0.baidu.com/70cFfyinKgQFm2e88IuM_a/baike/abpic/item/5d212aa8c1b96490cb130cad.jpg蓝堂 英（蓝堂 英） 声优：福山润、菊池心（孩童）
人类外表年龄：17岁
身高：177cm
蓝堂 英种族：贵族
能力：冰
绰号：“偶像”学长(因为名字发音而得)
是一个天才少年，自小狂妄，但见了枢之后变了
枢心腹之一，高阶等级的吸血鬼，非常崇拜枢，跟晓为表兄弟，蓝堂世家衷心拥护帝制支持玖兰王朝，少数反元老派。
TV版里，一直追随着枢，最后与枢和优姬离开了黑主学园
https://gss0.baidu.com/70cFfyinKgQFm2e88IuM_a/baike/abpic/item/8a95ad1ceb5333aa87d6b6d1.jpg一条 拓麻（一条 拓麻） 声优：千叶进步）
人类外表年龄：18岁
一条 拓麻身高：184CM
性格：很古怪总是不知他在想什么（总觉得他什么都知道只是不说）
爱好：看漫画、搞怪、和人类在一起、捉弄蓝堂。
重视朋友。和黑主理事长一样真心希望吸血鬼与人类和平共处，珍惜学院里的生活，原为被爷爷一翁派来监视玖兰枢的，因为不想背叛枢而最终与爷爷为敌。
一条世家是元老院忠实的拥护者，自己本家也是元老院的高层。爷爷是元老院的一翁。
TV版最后杀死爷爷后，不知去向。
https://gss0.baidu.com/70cFfyinKgQFm2e88IuM_a/baike/abpic/item/1e71f724d63e30204d088d6e.jpg支葵 千里（支葵 千里） 声优：保志总一朗
人类外表年龄：16岁
身高：173公分
支葵 千里种族：贵族吸血鬼。
职业：模特儿
能力：血鞭
父亲是玖兰李土，母亲是当时著名的模特，由於母亲只是贵族，因此不能成为纯血种。
身体暂时被父亲李土占用，不过由于莉磨发现了真像并加以阻止，使得支葵内心升起了波澜，于是决定要保护莉磨！要对抗家族，他对莉磨十分在意，或说是喜欢。貌似很爱睡觉……
动画版最后与莉磨一起寻找失踪的一条
https://gss0.baidu.com/70cFfyinKgQFm2e88IuM_a/baike/abpic/item/948bcfc81be320367f3e6fac.jpg远矢 莉磨（远矢 莉磨） 声优：喜多村英梨）
人类外表年龄：16
远矢 莉磨种族：贵族吸血鬼
职业：模特儿
能力：闪电
莉磨的衣着简单，双马尾，黑色蝴蝶结似乎偏爱短裙和长筒袜。
是一个我行我素的自我主义者。经常和支葵在一起，和支葵一起长大，是青梅竹马，对支葵很在意，平时不苟言笑的支葵也只有见了她才会露出孩子气的一面，后来莉磨为了救回支葵而被李土打成重伤，卧病在床，失去意识。动画版最后与支葵一起寻找失踪的一条。
https://gss0.baidu.com/70cFfyinKgQFm2e88IuM_a/baike/abpic/item/2cb4fefe6b412e105c6008a3.jpg院 晓（架院 暁） 声优：诹访部顺一
人类外表年龄：17岁
架院 暁身高：188cm
种族：贵族吸血鬼
绰号：“狂野学长”(因为有狂野美...囧)
能力：火
枢心腹之一，高阶等级的吸血鬼
跟英为表兄弟，喜欢琉佳。
动画版里，一直追随着枢，最后与枢和优姬离开了黑主学园
早园 琉佳（早园 瑠佳） 声优：皆川纯子
https://gss0.baidu.com/70cFfyinKgQFm2e88IuM_a/baike/abpic/item/cdfe728184628bf9bc3e1eae.jpg早园 琉佳（早园 瑠佳） 声优：皆川纯子
人类外表年龄：17岁
早园 瑠佳种族：贵族吸血鬼
能力：精神操控（在第二季的第12集里突出表明）
与英、晓一起长大。贵族吸血鬼。
和英及晓是青梅竹马，但是因为很崇拜枢，和英有对手的意识。但是面对于晓的关心，并不排斥。非常的讨厌锥生零对玖兰枢的态度，希望玖兰枢吸他的血，但只有一次成功（见动画第一季第七集：枢为了让优姬明白她和自己始终不是一类，而故意在优姬面前吸琉佳的血）十分的爱慕玖兰枢。
动画版里，一直追随着枢，最后与枢和优姬离开了黑主学园
https://gss0.baidu.com/70cFfyinKgQFm2e88IuM_a/baike/abpic/item/00a82701f74b2a2f7bec2cb3.jpg主要配角
黑主 灰阎（黒主 灰阎） 声优：乡田穗积） 黑主学园的理事长，同时亦是优姬和零的养父。历史上被誉为传说中的猎人。十分主张人类和吸血鬼之间是可以和平相处，因而设立黑主学园。
绯樱 闲（绯桜 闲） 声优：折笠富美子） 跟枢一样是纯血种吸血鬼。吸血鬼们称她为“狂咲姫”。 因当年以狩猎吸血鬼出名的“锥生一族”杀死了自己的爱人，为了复仇便灭了锥生一家。杀害了锥生零的双亲，吸了零的血，带走了壹缕。:之后附身在红玛利亚的身体进入黑主学园，最后因为被零的血蔷薇之枪打伤又被枢刺穿心脏致死。
锥生 壹缕（锥生 壱缕（きりゅう いちる） 声优：宫野真守） 闲的仆人，倾慕闲却是个得不到回应的单恋。 零的双胞胎弟弟。和零相反，身体虚弱的壹缕并没有成为吸血鬼猎人的能力，零夺走了他存在的意义，因而在心底憎恨零。之后得到了闲赏赐的血，身体不再虚弱。当他探望被囚禁的零时，命运之轮瞬间转动。
红 玛利亚（红 まり亜） 声优：中原麻衣） 贵族吸血鬼。红家是绯樱家很久以前的远方亲戚。能力是和动物精神连结（主要是家中的猫头鹰），可透过飞行中的猫头鹰的眼睛观察他人。 身体曾借给绯樱闲使用，而进入黑主学园夜间部就读过一段时间。而且因为天生身体虚弱，从没在“夜之社交界”里出现过。对壹缕有着特殊的情感。
次要人物
星炼（星炼） 声优：水野理纱） 玖兰枢的保镳、仆人，就像枢的影子。相当的忠心，很少说话。除了夜间部制服外常以旗袍示人。能力有瞬间转移、记忆移除等。充满了未知的神秘感。
夜刈 十牙（夜刈 十牙） 声优：安元洋贵） 零和壹缕的老师，NO.1的吸血鬼猎人。为保护零而失去了右眼。
若叶 沙赖（若叶 沙頼） 声优：水野理纱） 优姬从国中开始的好朋友，同时是她在阳之寮的室友。拥有看穿优姫烦恼的来源是零或是枢的敏锐直觉。很了解优姬，被她昵称为“小赖”。知道优姬是吸血鬼后并没有害怕，反而说她们无论发生什么事也是好朋友。
玖兰 树里（玖兰 树理） 声优：国府田麻理子） 和丈夫－悠是亲生兄妹。玖兰一族为了保留吸血鬼纯血的血脉，兄弟姊妹通婚是相当普遍的。 枢和优姬的母亲。十年前牺牲了自己的生命，封印优姬的吸血鬼记忆。曾献上血液予李土。
玖兰 悠（玖兰 悠） 声优：野岛裕史） 和妻子－树里是亲生兄妹。枢和优姬的父亲，为阻止李土的阴谋，战斗中不幸去世。
玖兰 李土（玖兰 李土（くらん りど） 声优：新垣樽助） 玖兰悠和树里的兄长。支葵千里的父亲，跟闲订婚的人，但爱着树里。 动画版中，十年前被枢击至重伤，之后为了完全复活，需要纯血种的玖兰优姬的血，为了这个目的附身支葵千里，之后被零所杀。