PCR和RT-PCR体系只有聚合酶的区别吗，缓冲液中第一链缓冲液是什么成分，做什么的。

Question

如题所述

Answer 1

1. 酶不同：
PCR中，聚合酶是以DNA为模板的DNA聚合酶。
RT-PCR中，逆转录酶是以RNA为模板的DNA聚合酶。
2.缓冲体系不同：
由于聚合酶不同，两者相应的反应buffer （RB）也略有不同。因为PCR有级联放大效应，buffer成分可能更复杂，以保证能减少非特异扩增。
例如：10 × Taq 缓冲液成分：
500 mM KCl, 100 mM Tris HCl (pH 9.0 at 25° ), 15 mM MgCl2, and 1% Triton X-100.
而RT-PCR主要靠逆转录酶的耐热性提高特异性，所以RB相对简单点：
250 mM Tris-HCl (pH 8.3 at 25°C), 375 mM KCl,15 mM MgCl2, 50 mM DTT.
3.模板不同：
DNA模板和RNA模板的区别
4.引物不同
PCR，一对特异引物
RT-PCR，一个特异引物+通用引物/随机引物
5.其他
RT-PCR中需要添加RNase抑制剂

实在想不起来其他不同了。

Answer 2

RT-PCR目前有两种，一种是利用SYBE-GREEN染料，另一种利用探针。利用SYBE-GREEN作燃料的，其体系需要SYBE-GREEN，另一种就是需要探针，所以区别不是在聚合酶，而是在检测染料这里！