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内参的选择
WB的无敌战神之路——WB的
内参选择
答:
选择内参时,
要考虑目标蛋白的定位、分子量,以及实验条件
。例如,如果你在研究蛋白质修饰(PTM),记得选用未修饰的目标蛋白作为对照,确保结果的准确性。收藏这篇文章,让你的实验无惧挑战。对照选择同样重要,如STAT3与Actin的配合,研究组蛋白位点时,要选用相应的组蛋白内参。考虑实验覆盖的组织类型,以...
[qPCR 专栏] 相对定量那些事儿(5)-
内参
基因
的选择
答:
内参基因的选择策略理想内参基因的选择并非一成不变,
需要根据实验目标和样本特性灵活选择
。在没有现成推荐时,可以参考北京基因组所生命与健康大数据中心的qPCR内参基因知识库,里面汇集了大量实验条件下验证过的基因供参考。比如,ICG公布的10个常用体内内参基因。内参基因的验证与优化在选择内参基因后,确保...
dna定量检测
内参
怎么找
答:
dna定量检测内参步骤如下:
1、选择合适的内参:根据实验的需要和研究对象,选择一个在待测DNA样本中普遍存在且稳定的基因片段作为内参
。
内参应具有稳定的表达水平
,以确保测量结果的准确性和一致性。2、设计内参引物:根据选择的内参基因片段,在该片段上设计引物。引物应具有高度特异性,只能扩增目标内参片段...
GAPDH,Tubulin,Actin选哪个做WB
内参
更好?
答:
4. 定位和细胞成分:做蛋白定位时,选择对应细胞组分的内参,如膜蛋白和核蛋白
。5. 总蛋白作为标准:尽管管家基因的差异性大,但总蛋白提取不受影响,线性范围更广,建议作为更可靠的选择(图五)。总之,每种内参都有其适用场景,
根据实验需求灵活选用
。在必要时,考虑使用总蛋白作为内参,以确保实验结...
反转录RT-PCR的
内参
如何
选择
?
答:
RT-PCR就是将RNA先反转录为cDNA,在将转录得到的cDNA作为模板进行PCR反应扩增目标片段。用于反转录的引物根据实验的具体情况
选择
随机引物、Oligo dT及基因特异引物的一种。对于短的不具有发卡结构的真核细胞mRNA三种都可。随机引物:适用于长的具有发卡结构的RNA。适用于rRNA、mRNA、tRNA等所有RNA的转录反应...
western blot二抗及
内参
怎样
选择
答:
内参
bate-actin或GAPDH多为单抗,来源于小鼠,一般可与大鼠、小鼠、人、兔均有交叉反应,即可作为上述任一来源蛋白的内参。Actin分子量为42kD,为肌动蛋白 GAPDH分子量为36kD,为磷酸脱氢酶
做RT-PCR
内参的
作用是什么?应该如何
选择
管家基因
答:
例如gapdh,在线粒体含量高的组织中丰度高,很多人认为用基因组DNA做
内参
会更加靠谱,当然这是后话了,
选择
gapdh无碍于现阶段的实验,如果觉得不靠谱,可以选择两个内参。你所研究的物种,应该有人已经发表过相应的内参,直接上数据库搜就可以了。原创内容,码字不易,万望采纳。
血清中miRNA 实时荧光定量PCR
内参的选择
?? 及上游引物的序列??
答:
血清中的miRNA做定量PCR的时候其实没有很好地
内参
可以用,这跟血清中miRNA的来源有关,我们一般都是提取miRNA的时候,提前加入一定量的某种特殊的人工合成的siRNA,作为外参使用。上游引物的序列还是取决于你想要研究的miRNA,miRNA的qPCR检测,上游引物都是特异性的,下游引物是通用的。
如何
选择
并调整
内参
基因
答:
还有斑马鱼的
内参
基因怎么选取?做的是相对定量。答:你说对了,荧光定量的灵敏度太大了。你要明白件事情,EB染色的情况下,在电泳上要形成一个条带的前提是存在5ng的DNA,也就是,如果你的非特异性扩增产物低于5ng的话,你在电泳上是观察不到的,但是SYBRGreen染色的情况下,定量PCR可以检测到。你...
几个标本之间做RT-PCR为什么要把RN的浓度调成一致
答:
内参的选择
:普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下。它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差,跑出的条带要进行灰度分析。用目的基因的积分光密度比上内参的光密度就是你这个基因实际表达的量。希望对你有所...
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