探索WB实验中的上样内参：GAPDH、Tubulin与Actin的选择指南
欢迎来到“医学科研小坑”公众号，这里我们将深入探讨三种常用WB内参：GAPDH、Tubulin和Actin。这些“管家基因”因稳定表达，常用于校准实验误差，确保结果的准确性。然而，它们各有特性，如何选择？让我们一起揭秘吧！
首先， Actin，作为肌动蛋白，分布在所有真核细胞中，有多种异构体，如α、β和γ，功能多样。在不同组织中，如肌肉和非肌肉细胞，其表达量有所差异。
Tubulin，微管蛋白的组成部分，α和β型蛋白共同构建细胞骨架，例如在神经细胞中，Tubulin在轴突和树突中表达较高，而在特定组织如骨骼肌中，Tubulin的表达可能会因功能需求而改变。
GAPDH，糖酵解过程中的关键酶，表达恒定，但特殊条件如缺氧和糖尿病可使其在特定细胞中表达增加。在使用GAPDH时需注意其可能受诱导处理的影响。
比较它们在不同样本条件下的表现，如图一所示，它们的线性范围和表达稳定性各有特点。在选择内参时，考虑以下几点：
1. 表达特异性：不同组织中，管家基因的表达差异很大，如肌肉和脂肪组织中Actin的差异明显（图二）。
2. 分子量差异：确保目的蛋白与内参分子量至少相差5kD，便于分析。
3. 实验处理影响：GAPDH等可能受诱导处理影响，需谨慎选择。
4. 定位和细胞成分：做蛋白定位时，选择对应细胞组分的内参，如膜蛋白和核蛋白。
5. 总蛋白作为标准：尽管管家基因的差异性大，但总蛋白提取不受影响，线性范围更广，建议作为更可靠的选择（图五）。
总之，每种内参都有其适用场景，根据实验需求灵活选用。在必要时，考虑使用总蛋白作为内参，以确保实验结果的准确性和一致性。在提取总蛋白时，推荐使用优化的柱式法，避免蛋白丢失，确保结果的可靠性（图五）。