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延伸温度对pcr有啥影响
pcr
反应
延伸
的
温度
答:
70~75℃之间。从pcr反应条件看出,延伸的温度70~75℃之间,常用温度为72℃,
过高的延伸温度不利于引物和模板的结合
,聚合酶链式反应(PCR)是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点是能将微量的DNA大幅增加。
为什么在
PCR
反应过程中,使用三个不同的
温度
变化
答:
第一个一般在94-95度左右,叫做变性,就是通过加热打开双链.第二个
温度
点叫做退火,根据引物的TM算出,一般比TM低5度,有利于引物的结合.第三个温度叫做
延伸
,一般采用72度.是引物结合后DNA聚合酶按照模板合成新的链.一分钟一千个碱基对.如此循环.现在很多
PCR
都采用2部法,由于采用了不同的DNA聚合酶(...
有哪些
条件可
影响PCR
反应
答:
PCR反应的延伸温度一般选择在70~75℃之间,常用温度为72℃,
过高的延伸温度不利于引物和模板的结合
。PCR延伸反应的时间,可根据待扩增片段的长度而定,一般1Kb以内的DNA片段,延伸时间1min是足够 的。3~4kb的靶序列需3~4min;扩增10Kb需延伸至15min。延伸进间过长会导致PCR反应条件为温度、时间和循...
长距离
PCR
的退火温度与
延伸温度
均是68度,这样
有什么
好处
答:
因为扩增的目的片段比较长,所以设计引物可能会长一点,为了保证扩增的特异性,会设置较高的退火温度,所以与
延伸温度
差不多了,这样可以一边退火一边延伸,节省扩增时间,提高扩增效率。
影响PCR
反应效率的因素
有哪些
?如何有效地提高PCR反应的效率?
答:
影响PCR
的主要因素 PCR技术必须有人工合成的合理引物和提取的样品DNA,然后才进行自动热循环,最后进行产物鉴定与分析。引物设计与合成目前只能在少数技术力量较强的研究院、所进行,临床应用只需购买PCR检测试剂盒就可开展工作,PCR自动热循环中影响因素很多,对不同的DNA样品,PCR反应中各种成份加入量和
温度
循环参数均不一...
影响pcr
的因素
有哪些
答:
影响PCR
的因素当中有
温度
,温度会影响PCR的三个反应阶段,包括了第1个阶段:高温变性,第2个阶段低温负性和第3个阶段:适温
延伸
都会严格的受到温度的调控。此外影响PCR的因素还包括了引物的设计效果,引物会直接定位到目的基因的两端并且有增加限制酶识别位点的效果。如果设计的完善,能够迅速的实现目标,...
PCR
技术反应过程中控制不同
温度
的意义?
答:
对
温度
的控制是为了实现体内DNA增值的过程。变性是为了让模板在高温(94°C)下解链为单链模板,退火(30-60)是为了让引物在低温下分别与变性的模板相结合,
延伸
(65-75)是由耐热DNA聚合酶的最适温度决定的,以引物为起点,沿着模板5‘-3’方向延伸。
为什么退火的
温度
提高,
延伸
的温度也要提高
答:
退火的
温度
提高,
延伸
的温度也要提高原因如下:1、退火温度是
影响PCR
反应特异性的重要因素,退火温度提高取决于延伸的温度,延伸的温度增加扩增产量,引物与模板间的错配现象也会增多,导致非特异性扩增上升。2、退火温度虽然可以提高反应的特异性,延伸的温度需要通时提高,不然会引起扩增效率下降,甚至无...
PCR
反应过程中94℃与72℃之间反应体系发生着
什么
反应,72℃与55℃之间...
答:
温度
升到72度后,Taq获得最适温度,活性增高,开始合成新链。再次升高温度时,根据模板的长短,如果是原始的模板,taq酶还正在合成新链,合成被打断。如果模板是新合成的,比较短,这时taq已经到了新合成连的末端,并且给末端加了个核苷酸-A.这个也就是为什么
PCR
产物其实是粘性末端:XXXXXXXXXXXX-A A-...
PCR
的
延伸温度
一般在
什么
范围之内
答:
七十至七十五摄氏度。反应的
延伸温度
一般选择在七十至七十五摄氏度之间,常用温度为七十二摄氏度。过高的延伸温度不利于引物和模板的结合。是指聚合酶链式反应,是扩增的一种方法,实验中很常用。包括高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应。延伸时间应该保证聚合酶可以完成扩增长度。另外一个考量是总延伸...
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