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PCR技术反应过程中控制不同温度的意义?
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推荐答案 2011-09-18
对温度的控制是为了实现体内DNA增值的过程。变性是为了让模板在高温(94°C)下解链为单链模板,退火(30-60)是为了让
引物
在低温下分别与变性的模板相结合,延伸(65-75)是由耐热DNA聚合酶的最适温度决定的,以引物为起点,沿着模板5‘-3’方向延伸。
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为什么在
PCR反应过程中
,使用三个
不同的温度
变化
答:
第二个温度点叫做退火,根据引物的TM算出,一般比TM低5度,有利于引物的结合.第三个温度叫做延伸
,一般采用72度.是引物结合后DNA聚合酶按照模板合成新的链.一分钟一千个碱基对.如此循环.现在很多PCR都采用2部法,由于采用了不同的DNA聚合酶(最佳温度60度).这样退火和延伸采用一个温度.
pcr
用两个退火
温度有什么
作用?
答:
另一种说法:熔解温度(Tm)是引物的一个重要参数
。这是当50%的引物和互补序列表现为双链DNA分子时的温度.Tm对于设定PCR退火温度是必需的。在理想状态下,退火温度足够低,以保证引物同目的序列有效退火, 同时还要足够高,以减少非特异性结合。合理的退火温度从55℃到70℃。退火温度一般设定比引物的 ...
为什么在
pcr反应过程中
,使用三个
不同的温度
变化
答:
因为有变性,退火,扩增三个
不同的反应
阶段,而这三个反应需要的最适
温度不同
。
pcr中温度
周期性变化的目的
答:
pcr技术
有三次
温度
变化处理,其作用分别是94至98摄氏度处理,促进模板DNA变性,由双链DNA变成单链DNA,52至65摄氏度处理,降温退火处理,促进变性的DNA与引物通过碱基互补配对,形成引物与模板结合的复合物,为聚合酶扩增奠定基础,65至72摄氏度处理,延伸阶段,DNA聚合酶以引物为合成起始,通过与模板碱基...
PCR的
退火
温度
对
反应的
影响
答:
引物退火
温度
是影响
PCR的
主要因素之一,一般来说每个引物都对应着各自的退火温度。影响:以文献作参考,在一定的温度范围内,退火温度越高,扩增的特异性也就越高。退火温度越低,扩增产物的特异性也就降低。如果退火温度过高,引物与模板结合差,电泳条带差,甚至没有扩增。如果温度过低,扩增特异性差,...
你进行一个
PCR反应
用怎样的
温度?
答:
【答案】:
PCR
一般以3种
不同的温度
进行。第一步,模板DNA变性,95℃温育1分钟。第二步,退火,使
反应
冷却下来以使引物与模板结合,这一步的精确温度由引物的融合温度决定,即引物能够与模板稳定结合的最高温度,一般为55℃,这依赖于引物的长度(引物越长、G+C含量越高,融合温度越高)。一般来说,...
PCR的
原理是什么,它
有什么
用途
答:
在实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当
温度
降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化
控制
DNA的变性和复性,加入设计引物,DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。但是,DNA聚合酶在高温时会失活,因此,每次循环都得加入新的DNA聚合酶,不仅操作烦琐,而且价格昂贵,制约了
PCR技术
...
pcr
保温
温度
答:
在
pcr反应过程中
,要使用三个
不同
的温度变化,有变性,退火,扩增三个不同的反应阶段,而这三个反应需要的最适温度不同。具体设置如下:1、变性反应
温度的
设置 当
温度控制
在90 °C以上时DNA会发生变性,双链DNA解链成单链。2、退火反应温度的设置 当温度下降到50 °C的时候,DNA复性,两种引物通过...
PCR反应
退火
温度的
高低与什么因素有关
答:
退火
温度
是影响
PCR反应
特异性的重要因素。引物与模板复性所需要的退火温度取决于引物的长度、碱基组成及其浓度。引物长度越短,引物中G+C的含量越低,所需的退火温度越低。虽然降低退火温度可能增加扩增产量,但引物与模板间的错配现象也会增多,导致非特异性扩增上升。相反,提高退火温度虽然可以提高
反应的
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