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takara双酶切buffer通用表
...如何确定?最好是说明原理。所用的
酶
都是
Takara
公司的
答:
酶2 0.5ul buffer 去
Takara
产品目录查
双酶切buffer表
,按照那个倍数加,有时候需要BSA 水补足 20ul 30或37度,1-5小时都可以。有个别酶需要55度。注意,酶别加多了,甘油浓度过高影响酶的活性。反应体系中甘油浓度要小于1%,而酶是储存在50%甘油中。
SacI 和BamHI
双酶切
用什么
buffer
答:
NEB的话,BamHI是用
buffer
2,,3,4 ,酶活性都是100%,SacI是buffer1,4,酶活性是100%。所以
双酶切
的话用buffer 4 好了。其他公司的酶的话,可以查目录或者网上的资料,看每种酶在不同buffer中的酶活性,然后选双酶切的buffer。
Takara
的NheI 和BamHI
双酶切
体系表中没有双酶切缓冲体系应该如何选用缓 ...
答:
1、如果你用的是
Takara
的
酶
,应该就只能分步了,而且BamHI还是30度反应,虽然也可以在37度切,但如果是分步切的话还是用30度吧。2、为什么不用NEB的酶呢?可以用
buffer
1或2同时切(好像是,你需要自己再确认下),而且NEB的这两种酶都有HF酶,效率更高,都可以在buffer4中达到100%的效率。以上,...
两种酶的反应缓冲液不一样,做
双酶切
时如何处理?
答:
如果是分开
酶切
的话,第一个酶切完成后要回收(可用醇回收,效率比较高)后,再进行第二次酶切。做转化的时候,进行酶连接反应时,注意保持低温状态,因为LIGASE酶很容易降解。为保险起见,一般连接3小时,16度;对含有AMP-RESISTENCE的质粒铺板时,注意加AMP时的温度,温度过高,会使克隆株无法筛选出来。
neb
buffer
2可以用
takara
的什么buffer代替
答:
不同公司的酶和
buffer
命名和特性是不完全一样的。像
takara
公司的内切酶有一个
双酶切
的列表,列出了每两种酶双酶切最适用的buffer。像NEB公司的话,酶4种buffer中的活性都列出来了,选一个两种酶活性都高的就可以了。其他公司的产品也一样,主要是认真阅读说明书和产品资料。祝你好运。
takara
公司的EcoR1和Not1 50μl
双酶切
反应体系的配制?
答:
酶各加1.5 ul,底物加入在2ug,37℃,1*H
Buffer
+BSA,
酶切
12小时。
NotI和SalI可不可以
双酶切
答:
可以的啊!
takara
的酶可以用
buffer
H做公用buffer,而NEB的酶notI-HF 和salI-HF 可以用buffer 4做为公用buffer。还有要注意你的两个
酶切
位点之间有没有保护碱基,如果没有:那还是要分步切的,否则切不开。
BamHI NdeI
双酶切
用哪种缓冲液
答:
TaKaRa
的
酶
的话,用K
buffer
。
用
TaKaRa
的Bln1和Sal1做
双酶切
,用的M
buffer
答:
嗯,需要分开
酶切
用
Takara
的BamH 1和Xho 1做同步
双酶切
,但是BamH 1的最佳温度是30℃而X...
答:
37度放心切,没问题。不要小看BamHI,这个
酶
的效率很高的。一般有星活性的酶都不担心切不开,而是担心切多了=.= 如果一定担心温度的问题,或者最后实验结果是37度切不开,则考虑以下两种方法:1. BamHI和XhoI都是常用酶,比较便宜,可以换一家公司买。至少Fermentas和NEB的BamHI都是37度的。2. ...
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