www问答网
所有问题
当前搜索:
双酶切buffer对应表
两种酶的反应缓冲液不一样,做
双酶切
时如何处理?
答:
如果是分开
酶切
的话,第一个酶切完成后要回收(可用醇回收,效率比较高)后,再进行第二次酶切。做转化的时候,进行酶连接反应时,注意保持低温状态,因为LIGASE酶很容易降解。为保险起见,一般连接3小时,16度;对含有AMP-RESISTENCE的质粒铺板时,注意加AMP时的温度,温度过高,会使克隆株无法筛选出来。
HindIII和EcoRI
双酶切
用NEB哪个缓冲液,还有BamHI 和HindIII双酶切用哪...
答:
推荐的是
buffer
3.1,但是这个buffer这两个
酶
都没带,而且因为在3.1中貌似活性都只有50%左右,所以酶的用量得增加,而且时间得加长。如果实在不行,就分别切好了。网页上表格看得比较清楚(https://www.neb.com/tools-and-resources/interactive-tools/double-digest-finder?enzyme1={2F6573A8-32BE-...
SacI 和BamHI
双酶切
用什么
buffer
答:
NEB的话,BamHI是用buffer2,,3,4 ,酶活性都是100%,SacI是buffer1,4,酶活性是100%
。所以双酶切的话用buffer 4 好了。其他公司的酶的话,可以查目录或者网上的资料,看每种酶在不同buffer中的酶活性,然后选双酶切的buffer。
如何选择
酶切
酶极其
buffer
答:
体系不管多大,都有相应的buffer,只要将buffer变为1x工作浓度就行了
,两个同时切的话,需要注意酶的量,看单位是多少,一般是1ul的酶切1ug的质粒或者其它dna序列,尽量酶的体积不能超过体系的10%,因为里面含有甘油,可能会影响酶切效率。
双酶切
酶切体系和
buffer
怎么设计比较合适?
答:
体系不管多大,都有相应的buffer,只要将buffer变为1X工作浓度就行了
,两个同时切的话,需要注意酶的量,看单位是多少,一般是1ul的酶切1ug的质粒或者其它DNA序列,尽量酶的体积不能超过体系的10%,因为里面含有甘油,可能会影响酶切效率。
分步
双酶切
答:
我可以告诉你步骤:如果两种
酶
的
buffer
浓度相同可以同时加进去切,如果不相同,先用低浓度切,再用高浓度切。我只说后一种:30/50ul体系中2ul第一种酶,3ul buffer,按照你pcr产物的亮度来配比,不足部分用水补充,反正达到30ul就可以了,切两个小时后,加第二种酶2ul,buffer5ul,用水补到50ul...
请教高手10*
buffer
,2*buffer,1*buffer是什么意思啊?
双酶切
时他们之间...
答:
10*的就是十倍浓度的 比如说你要配50ul体系 那就加5ul的10*
buffer
其他同理
Hind III 和Sal I
双酶切
反应体系
答:
以20微升体系为例 方法一
Buffer
Tango™ 4微升 HindIII 1 微升 SalI 1 微升 Incubate at 37°C 2-3小时 方法二 Buffer R 2 HindIII 0.6 SalI 2.4 Incubate at 37°C 2-3小时 注意:最好用第一种方法,效果更好 ...
Nhe1和EcoR1做
双酶切
的用什么
buffer
好。。
答:
这个要看是哪个公司买的
酶
,比如我买的是NEB公司的,Nhe1和Ecor1都用共同的
buffer
4,也就是随包送的smart buffer,这两种酶在buffer4里都是100%活性,所以选用这种。
双酶切
的注意事项
答:
烤箱一般温度为55-60度,然后做的时候拿出来,这样好掌握温度。铺板前后注意用吹风机吹干。3、 对照的设立:为验证
双酶切
是否成功,可做如下对照:酶切反应时加各单酶分别切,两管,用同一种
BUFFER
,跑胶,看单切的两管是否成线性.如两管均成线性可初步判断双酶切成功.做转化时,也要进行对照。
1
2
3
4
5
6
7
8
涓嬩竴椤
其他人还搜
双酶切buffer通用表NEB
酶切体系中样品加多少怎么算
takara双酶切说明书
takara双酶切buffer通用表
takara酶切buffer表
双酶切同一个buffer加多少
cutsmart酶切体系
BamHI和XhoI双酶切buffer
takara单酶切buffer通用表