怎样构建融合蛋白

Question

如题所述

Answer 1

融合蛋白(fusion protein)
融合蛋白有两种不同的含义，一种是通过DNA重组技术得到的两个基因重组后的表达产物。另一种含义就是介导两个细胞质膜融合的一组蛋白，如在仙台病毒脂双层外侧小叶中含有的两种糖蛋白之一，介导病毒被膜与宿主细胞质膜的融合作用。另一种糖蛋白是血细胞凝集素神经酰胺酶。
两个不同的蛋白质连成一个大分子。可以通过化学方法连接，也可通过基因的融合来实现。在基因操作中，对一些分子数小的多肽基因常采用融合的方法与某一基因（如lac）相连，二者之间接上某一酶（如凝血酶）的切口，以增加在体内表达后产物的稳定性，也有的故意使两个分子串连融合以提高疗效，如IL-3与GM-CSF。也有与分泌性蛋白的信号肽基因组成融合基因，以使表达产物分泌到膜外或胞外。
————百度百科
根据以上思路可以从基因和蛋白两方面来实现。
基因方面：如果你2蛋白的一级结构是知道的就可以知道他们的DNA序列，设计将2个蛋白的DNA序列重组到一个质粒中然后努力去表达，纯化。
蛋白方面：应该涉及到细胞融合方面的内容我不是很清楚，我去查下相关资料
这里有篇文献《一种抗菌肽和aFGF融合蛋白的构建和表达》
http://cache.baidu.com/c?m=9f65cb4a8c8507ed4fece763105392230e54f7346c8c8d533f87c51f84642c101a39feec787145579b9e20301cfe1400aca76a342a0237b79ccff94adfb9963f28fc24237768864505d46dacd64073c0709358e9ac0ee7cca662c5fdc5d3a95258cc57127af6a0890c5603ca19f31666e2f6cd4a465a1ab9bb2d33a2086a7fc47f15fe1daabc673f54dae1dd2b1a9e7bc4244cd7f93aa74f18a265d7086b5753d138a609213140e75857fd534d06859d58f02a085753bd5fc3b2d6c69d5fffd6&p=c462c715d9c410fc57ece6241b&user=baidu

Answer 2

大部分的融合蛋白的构建都在质粒上，有的也在染色体上。一般来说，选好酶切位点，或者人工设计好酶切位点，进行DNA的酶切与连接。再转入细胞进行表达。
要注意的是，
蛋白和蛋白之间最好要设计几个甘氨酸，这样防止蛋白由于直接相连而造成空间折叠时构想发生改变，影响活性。
如果纯化后要将融合蛋白切开的话，需要在蛋白的相连处设计蛋白酶的酶切位点，但酶切位点的选择也要注意不能在蛋白内部有酶切位点。
融合蛋白的注意事项还有很多，最好看一些蛋白手册或者相关的文献。由于不清楚你的融合蛋白，我就不提供资料了。