我提的质粒在0.8%的琼脂糖电泳中，跑完后条带不清晰，不知道是什么原因，谁能帮我分析一下呢？？？
采用常规提质粒方法，不用试剂盒，0.8%跑胶。结果如下图所示，我是哪个步骤出了问题么？？？
加溶液2和溶液3的时间，我是用秒表计时的，总共不到5分钟的时间，从第一个加入溶液2到最后一个加上溶液3共用了4分钟。可以把图放大了看一下，图里有两条带，不是三条，而且很弱。
我提多个质粒的时候没有问题，但是一到10几个的时候，就会挺弱的，不知道是什么问题呢？？
首先你跑胶的Marker呢？电泳一定要用一个道跑Marker,以确定你的目标DNA（质粒）大小以及你的琼脂糖胶和缓冲液没有问题。
如果你的Marker跑出来没有问题，从上图看应该是你的质粒DNA浓度太高，最好质粒上样总量在500ng左右，不要超过1000ng。目标条带浓度过高容易造成拖带。
最后，质粒由于是环状，超螺旋DNA和线性DNA的电泳速度不一样，所以电泳前一定要做酶切，把环状质粒切成线状；最好在质粒上有两个酶切位点，这样酶切后可以通过两条DNA条带大小确定所提取质粒是否正确。
如果你的Marker跑出来没有问题，从上图看应该是你的质粒DNA浓度太高，最好质粒上样总量在500ng左右，不要超过1000ng。目标条带浓度过高容易造成拖带。
最后，质粒由于是环状，超螺旋DNA和线性DNA的电泳速度不一样，所以电泳前一定要做酶切，把环状质粒切成线状；最好在质粒上有两个酶切位点，这样酶切后可以通过两条DNA条带大小确定所提取质粒是否正确。
温馨提示：答案为网友推荐，仅供参考
第1个回答 2010-05-21
首先要有空质粒marker，否则没法判断。
此外如果不是菌液太淡的话，我觉得你在加溶液二的时候，可能没控制好时间，质粒条带一般都很亮的。
最后是下面很亮的一团，即RNA的问题，个人觉得除非有需要，RNA没除也无所谓
个人经验是：抽质粒的时候溶液2是个挺关键的因素，温度注意下，动作要轻柔有效，时间控制要合适，手感对了问题就很少了。
此外如果不是菌液太淡的话，我觉得你在加溶液二的时候，可能没控制好时间，质粒条带一般都很亮的。
最后是下面很亮的一团，即RNA的问题，个人觉得除非有需要，RNA没除也无所谓
个人经验是：抽质粒的时候溶液2是个挺关键的因素，温度注意下，动作要轻柔有效，时间控制要合适，手感对了问题就很少了。
第2个回答 2010-05-21
加点RNA酶，缓冲液的pH值很关键
第3个回答 2010-05-21
没有除RNA
相似回答