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酶标记抗体的方法
酶标抗体
怎样鉴定,用什么
方法
?
答:
酶
量(�0�8g/ml)=OD403nm×0.42 (1)戊二醛法:IgG(mg/ml)=(OD280nm-OD403nm×0.42)×0.94×0.62 (OD403×0.42为酶在403nm的光密度,
抗体
与酶-戊二醛结合后OD280nm约增加6%,所以乘以0.94校正。由于兔IgGOD280nm=1.0时为0.62mg,所以又乘以0.62)。 (2)...
HRP(辣根过氧化物
酶
)
标记抗体的
原理及操作流程是什么具体怎么弄_百度知 ...
答:
HRP标记抗体的方法:根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结合物,
可用戊二醛二步法和过碘酸钠法。尤以简易过碘酸钠法更为常用
。戊二醛二步法原理:戊二醛为一种双功能试剂,通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合,形成酶-戊二醛-免疫球蛋白结合物。在不断搅拌下,每升滤液中慢慢加...
酶联免疫法的
酶标记
法
答:
酶与抗体交联,
常用戊二醛法和过碘酸盐氧化法
。郭春祥建立的HRP标记抗体的改良过碘酸钠法简单易行,标记效果好,特别适用于实验室的小批量制备。其标记程序为:将5μg HRP溶于0.5ml蒸馏水中,加入新鲜配制的0.06 mol/L的过碘酸钠(NaIO4)水溶液0.5ml,混匀置4℃冰箱30分钟 , 取出加入0.16mol/...
ELISA实验步骤有哪些?
答:
酶标记抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合
。滴加底物溶液后,底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色氧化型,出现颜色反应。因此,可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应,颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。此种显色反应可通过ELISA检测仪...
抗体标记的
步骤
答:
染料水溶液可用于标记,如果增大反应萤光团的比例不利于整体平衡的话,可以测定PBS中适当稀释后的一份贮存液并使用染料的消光系数来确定贮存液中的萤光团浓度。在0. 1mol/L碳酸盐- 碳酸氢盐缓冲液中(pH9.4)室温15分钟完成
抗体标记
:在0.25 ~ 1ml缓冲液中溶解1mg样IgG(6.45nmol), 添加200nmol...
指出ELISA有哪几种常用
方法
?各种方法在操作上
有什么
异同?应用有什么异 ...
答:
间接法是检测
抗体
常用
的方法
。其原理为利用
酶标记
的抗抗体(抗人免疫球蛋白抗体)以检测与固相抗原结合的受检抗体,故称为间接法。操作步骤如下:1)将特异性抗原与固相载体联结,形成固相抗原。洗涤除去未结合的抗原及杂质。2)加稀释的受检血清,保温反应。血清中的特异抗体与固相抗原结合,形成固相抗原抗体复合物。经洗涤...
酶
联免疫检测的几种
方法
及其原理
答:
assay):将已知的特异抗体包装在固相载体(塑料板凹孔或纸片上),加入待检标本,标本中的抗原即可与载体上的抗原结合,洗去未结合的材料后加入该抗原的
酶标记抗体
,洗去未结合的酶标抗体,加底物显色,用酶免疫检测仪测量颜色的光密度,可定量测定抗原。间接法(indirecr ELISA)常用于检查特异抗体。先将...
ELISA实验检测
抗体的
实验步骤?
答:
(3)加酶标抗抗体,主要根据你的一抗来确定二抗用什么。可用酶标抗人Ig以检测总抗体,但一般多用酶标抗人IgG检测IgG抗体。固相免疫复合物中的抗体与
酶标抗体抗体
结合,从而间接地
标记
上酶。洗涤后,固相载体上的酶量与标本中受检
抗体的
量正相关。(4)加底物显色 间接法由于采用的酶标二抗是针对一类...
免疫印迹与elisa和western blot
有什么
区别,似乎原理差别不大,谁能细致...
答:
ELISA
方法
的基本原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合,此种结合不会改变
抗体的
免疫学特性,也不影响酶的生物学活性。此种
酶标记抗体
可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。滴加底物溶液后,底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色的氧化型,出现颜色反应。2、应用不同...
elisa法有哪几种类型及其原理
答:
2.原理:在检测过程中,第一次特异性抗体与抗原结合生成免疫复合物,随后加入待检测物质,其抗原结合剩余的空位,再加入第二抗体,二抗与第一次抗体产生的免疫复合物进行结合。二、非竞争ELISA 1.反应过程:首先,在已经涂有抗原的孔板上加入待测的标本及一定量的
酶标记抗体
(例如辣根过氧化物酶标记抗体...
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免疫酶法标记抗原或抗体的酶常用
标记抗体的酶所具有的特点
利用酶标记的抗抗体以检测
酶标记的抗体或抗原称为
酶标记抗体免疫组化染色方法
不能用于标记抗体的酶
酶标记抗体的原理
吖啶酯标记抗体方法
酶标记抗体用什么稀释