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双酶切用什么buffer
相隔1Kb的两个酶切位点在进行
双酶切
时会破坏彼此的酶切位点吗?如果会...
答:
这个距离隔得算是还可以啊,一般一个酶的作用位点才4-6个碱基,1000个碱基还相互干扰的比较少。如果特别担心,可以换成两次单酶切,先切A,稍微过下柱子,再切B,如果没有问题,反过来用B先切,过柱后再切A。如果两种都没问题,可能要考虑是不是两种酶一起
双酶切
的时候,
buffer
或者温度选的不合适...
PCR
Buffer
的作用是
什么
?急用,
答:
PCR反应的缓冲液的目的是给Taq DNA聚合
酶
提供一个最适酶催反应条件.目前最为常用的缓冲体系为10-50mmol/L Tris-HCl (pH8.3-8.8,20℃) Tris是一种双极性离子缓冲液,20℃时其pKa值为8.3,△pKa值为-0.021/℃.因此,20mmol/l Tris-HCl(pH8.3,20℃)在实际PCR中,pH变化于6.8-7.8之间....
T4
buffer
,green buffer有
什么
区别?可以相互替代着用吗?
答:
你说的是那个公司的呢?如果按fermentas来看,T4 连接
酶
的
buffer
是供T4 DNA连接酶连接用的,而green buffer应该是快切酶(快速反应的核酸内切酶)的一个通用的buffer,并混有染料,可以直接上样进行电泳
双酶切
总是切不开.有没有人用过NEB的NotI这个酶
答:
NEB的
酶
一般没问题,切不开的常见原因:1 酶过多,导致甘油浓度过高,抑制酶活 2 保护碱基不足 3
buffer
不对
用高保真聚合
酶
PCR 可不可以和普通
buffer
一块用
答:
不可以,不同的
酶
对应的
buffer
不一致。以pfu与taq为例,虽然两种酶作用几乎差不多,但实质上是不同的酶,从盐离子种类、盐离子浓度及最适pH都不同
双酶切
总是切不开.有没有人用过NEB的NotI这个酶
答:
NEB的
酶
一般没问题,切不开的常见原因: 1 酶过多,导致甘油浓度过高,抑制酶活 2 保护碱基不足 3
buffer
不对
Buffer
P1、 BufferP2和BufferP3分别有
什么
用?
答:
而MgCl2则是PCR反应的关键因素之一,可以促进DNA的扩增。
Buffer
P3还可能包括其他成分,如dNTPs、Taq聚合
酶
等,具体作用取决于PCR反应的类型和要求。需要注意的是,不同实验室和研究领域的Buffer可能存在差异,具体
使用
时需要根据实验要求选择适当的Buffer,并严格按照实验方案进行操作 ...
为
什么
我的
双酶切
实验总是失败呢 我用的是 EcoRV-HF限制酶和Sph1-HF...
答:
你先分别用单个酶
酶切
,看有没有问题。这两种酶都不受甲基化影响,应该没有问题。如果单中酶切不开,很可能是质粒有问题了(突变,重组,污染等)。如果都切得开,试试换个
buffer
。
分子生物学中实验中用到了很多的
buffer
答:
.没有明白你想说
什么
.要单纯说
buffer
...做蛋白的,有PBS,甘氨酸缓冲液,做PCR的,有缓冲体系,电泳时的,loading buffer...LAMP..thermo buffer..热源缓冲液.还有在过柱的,elution buffer...DNA 试剂盒用的BD buffer,PW buffer.wash buffer.B2 buffer...好多啊.你想说什么啊.
Marker, DNA, EB, Loading
buffer
作用
答:
标记(Marker),染色体上一个可以被识别的区域(比如限制性内切酶的
酶切
点,基因的位置等)。标记的遗传能够被检测出来。标记可以是染色体上有表达功能的部分(比如基因),也可以是没有编码蛋白质功能但遗传特性能够被检测出来的部分。DNA分子的功能是贮存决定物种的所有蛋白质和RNA结构的全部遗传信息;策划...
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