www问答网
所有问题
当前搜索:
双酶切用什么buffer
载体
双酶切
后消失,怎样解决
答:
减少
酶
用量试下
20ul
双酶切
体系和10ul双酶切体系的区别
答:
1、产物浓度不同 20ul
双酶切
体系比10ul双酶切体系产物的浓度高。2、DNA反应量不同 20ul双酶切体系所含DNA要比10ul双酶切体系含有的DNA多,进行双酶切时所要切的DNA量也不同。研究中常用的双酶切体系就是20ul双酶切体系和10ul双酶切体系,二者除了调配比例之外,所用的酶是相同的,所以反应...
...2.1质粒载体了,酶切鉴定单、
双酶切
要
用什么
酶?
答:
单酶切可以用BstX I,
双酶切
可以用Spe I和EcoR V。原则上,你做单酶切鉴定需要你的插入片段前后都有的这个酶切位点,因为你的片段里面已有EcoR I,所以这个酶不能用,因为会切断内部PCR序列。对于双酶切,考虑的则是PCR片段前后不是共有的酶切位点。原则上,酶切位点离你的目的片段越近越好。
载体
双酶切
后消失,怎样解决
答:
温度尽量低,切的时间长一点。。。估计是出信号活性了,我原来切Sma1、Sac1时也出过这事,最后是16度切了22小时才过关。。。切了9次。。载体我不知道,要不还有个可能,这两个酶的
酶切
位点过近也是切不出来的,但这个我没亲眼看见,是师姐告诉我的 另外,最好是PCR或提质粒产物不经过冷冻,...
20ul
双酶切
体系和10ul双酶切体系的区别
答:
1、产物浓度不同 20ul
双酶切
体系比10ul双酶切体系产物的浓度高。2、DNA反应量不同 20ul双酶切体系所含DNA要比10ul双酶切体系含有的DNA多,进行双酶切时所要切的DNA量也不同。研究中常用的双酶切体系就是20ul双酶切体系和10ul双酶切体系,二者除了调配比例之外,所用的酶是相同的,所以反应...
...现在想用20微升体系,关键是
BUFFER
的浓度,谢谢大家
答:
buffer
量是
酶
量的2倍,按比例增加或减少
进行质粒
双酶切
时,两种酶同时加效果好,还是两种酶分开加效果好?谢谢...
答:
看是哪两种酶。如果两种酶在同一种
buffer
里的
酶切
效率都不错,那就同时加;如果很难找到一种同时合适两种酶的buffer,就只能分开加。
质粒
双酶切
后怎么用酒精沉淀
答:
双酶切
以后,应该还需要用酚氯仿把酶去除掉,然后再做后面的步骤(这个和提质粒的沉淀步骤就是一样的):1. 1/10 体积的乙酸钠(3 mol/L ,PH=5.2)充分混匀 2. 2 倍体积冰预冷的无水乙醇,混匀,- 20℃ 15~30 分钟;3. 12,000 g X 10 min,弃上清;4. 再加1ml 70%乙醇...
质粒
双酶切
时
使用
的是不同公司的酶,不知
buffer
如何加?是两种buffer都...
答:
不知
琼脂糖电泳分离6kb和7kb的片段,
用什么
浓度的胶?现在是条带太宽,在600...
答:
其次,
酶切
时间不用太长,只是为了检测的话十几二十分钟就可以,如果回收37度水浴1小时就足够了。再次,胶做的好坏、电泳
buffer
配制
使用
次数、电泳电压的大小对电泳结果都是有影响的,胶最好是现做的,放时间长不好,电泳buffer用的次数多了,条带会有弥散现象;电压120V就可以,太高了对仪器对结果都...
棣栭〉
<涓婁竴椤
3
4
5
6
8
7
9
10
11
12
涓嬩竴椤
灏鹃〉
其他人还搜