第1个回答 2010-11-27
你所说的三个温度变化即变性、退火和延伸过程。变性过程是DNA双链打开变为单链的过程,随后温度降低至退火温度,使特异性的引物与模板发生结合,最后进入延伸过程,Taq酶在此温度下利用单脱氧核苷酸沿着DNA链进行合成,并最终形成2个相同的PCR产物。其实目前有的试剂盒已经可以进行2个温度变化了,退火和延伸都是用60℃,在荧光定量PCR方面是用较多。本回答被网友采纳
第2个回答 2012-03-22
1、变性:加热使模板DNA在高温下(94-95℃)变性,双
链间的氢键断裂而形成两条单链,即变性阶段。
2、退火:在体系温度降至37-65℃,模板DNA与引物按碱基
配对原则互补结合,使引物与模板链3’端结合,形成部分
双链DNA,即退火阶段。
3、延伸:体系反应温度升至中温72℃,耐热DNA聚合酶以单
链DNA为模板,在引物的引导下,利用反应混合物中的4
种脱氧核苷三磷酸(dNTP),按5’到3’方向复制出互补
DNA,即引物的延伸阶段。
第3个回答 2010-11-27
这叫三步法,也有两个温度的。
一般的都是变性,退火,延伸,当退火温度达到65度以上的时候即快接近延伸温度的时候采用两步法,看看pcr说明书就可以明白了。
要想明白原因的话,就不能不好好理解原理。首先是双链的分开,即变性。退火温度是引物与模板相结合的过程,一般不超过TM-5度,一般是50-55度,pcr的时候调节温度获取特异性好的条带就ok了。延伸就不用讲了