www问答网
所有问题
.PCR反应中,循环温度范围对引物DNA双螺旋稳定性的影响及PCR产物的影响?
越快越好,谢谢
举报该问题
推荐答案 2010-07-15
PCR循环有三个温度:变性温度(与模板链性质有关),退火温度(与引物),延伸温度(与聚合酶有关),每一个温度都会影响产物的性质。
退火温度过高,引物和模板不能结合,则产物量很少;过低则易发生错配,使产物特异性降低。
延伸温度过高,产物易变性,不稳定;过低则易错配,使产物特异性降低。且延伸温度对酶活性影响很大。
了解了循环的三个主要步骤和发生的反映,就可以很清晰的分析PCR过程中的问题了
温馨提示:答案为网友推荐,仅供参考
当前网址:
http://www.wendadaohang.com/zd/A3d1GdKG5.html
相似回答
PCR循环
参数有哪些要求?
答:
1.模板变性温度变性温度是决定
PCR反应中
双链DNA解链的
温度,
达不到变性温度就不会产生单链DNA模板
,PCR
也就不会启动.变性温度低则变性不完全
,DNA双
链会很快复性,因而减少产量.一般取90~95℃.样品一旦到达此温度宜迅速冷却到退火温度.DNA变性只需要几秒种,时间过久没有必要;反之,在高温时间应尽量缩短...
影响PCR反应
效率的因素有哪些?如何有效地提高
PCR反应的
效率?
答:
影响PCR反应
效率的因素主要包括以下几个方面:1.
温度循环
参数:
在PCR
自动热
循环中,
变性与退火的温度是关键因素。变性温度应设定在90~95℃,以确保双链
DNA
解链产生单链DNA模板。退火温度应根据
引物的
(G+C)%含量进行调整,以提高
PCR的
特异性和产量。延伸温度通常设定在70~75℃,以适应Taq DNA聚合...
pcr的反应
条件是什么
答:
②退火(复性)温度与时间:退火温度是
影响PCR
特异性的较重要因素。变性后温度快速冷却至40℃~60℃,可使引物和模板发生结合。由于模板
DNA
比引物复杂得多
,引物
和模板之间的碰撞结合机会远远高于模板互补链之间的碰撞。退火温度与时间,取决于引物的长度、碱基组成及其浓度,还有靶基序列的长度。对于20个...
PCR
技术
中,
要反复高温处理以使更多的
DNA双
链解旋吗?
答:
是的,每个循环都需要高温变性,解开
DNA双螺旋
。标准
的PCR
过程分为三步:DNA变性 (90℃-96℃):双链DNA模板在热作用下,氢键断裂,形成单链DNA 退火 (60℃-65℃):系统温度降低
,引物
与DNA模板结合,形成局部双链。延伸 (70℃-75℃):在Taq酶(在72℃左右,活性最佳 梯度PCR仪)的作用下,...
pcr反应
延伸的
温度
答:
70~75℃之间。从
pcr反应
条件看出,延伸的温度70~75℃之间,常用温度为72℃,过高的延伸温度不利于引物和模板的结合,聚合酶链式反应(PCR)是一种用于放大扩增特定的
DNA
片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制
,PCR的
最大特点是能将微量的DNA大幅增加。
PCR的
原理是什么
?在PCR反应中
是否
循环
次数越多,合成的
产物的
数量越多...
答:
【答案】:
PCR
技术的其基本原理是在模板、引物、4种dNTP和耐热
DNA
聚合酶存在的条件下,特异扩增位于两段已知序列之间的DNA区段的酶促合成反应。每一循环包括高温变性、低温退火、中温延伸三步反应。每一
循环的产物
作为下一个循环的模板,如此
循环,
介于两个引物之间的新生DNA片段得到大量扩增。在一定范围...
重叠
pcr引物
退火
温度
差太多怎么办
答:
1.模板变性温度变性温度决定
PCR反应
双链DNA解链温度达变性温度产单链DNA模板PCR启 变性温度低则变性完全
DNA双
链快复性减少产量 般取90~95℃ 品旦达温度宜迅速冷却退火温度 DNA变性需要几秒种间久没必要;反高温间应尽量缩短保持Taq DNA聚合酶力加入Taq DNA聚合酶高变性温度宜超95℃ 2.引物退火温度...
讨论
影响PCR
可靠
性的
因素。
答:
【答案】:(1)
温度循环
参数:变性温度取决于
PCR反应中双
链
DNA
解链的温度;退火温度决定PCR特异性与产量;引物延伸
温度温度的
选择取决于Taq DNA聚合酶的最适温度。(2)引物设计:引物长度一般在16~40 bp之间,G+C分布均匀,应避免出现发卡结构和错配现象。引物使用浓度要适宜,浓度过低导致产量下降,过高...
为什么
在PCR反应
过程
中,
使用三个不同的
温度
变化
答:
第一个一般在94-95度左右,叫做变性,就是通过加热打开双链。第二个温度点叫做退火,根据
引物的
TM算出,一般比TM低5度,有利于引物的结合。第三个温度叫做延伸,一般采用72度。是引物结合后
DNA
聚合酶按照模板合成新的链。一分钟一千个碱基对。如此循环。现在很多
PCR
都采用2部法,由于采用了不同的DNA...
大家正在搜
稳定DNA双螺旋最主要的力
稳定dna双螺旋的主要因素是
DNA双螺旋结构的特点
简述DNA的双螺旋结构
DNA双螺旋结构的要点是什么
DNA双螺旋结构与功能的关系
dna的双螺旋结构是谁发现的
DNA双螺旋意义
dna双螺旋结构的维持主要靠