PCR反应后为什么要酶切,就是那个酶切的目的是什么

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推荐答案 2013-08-05

在设计pcr引物时，会将酶切位点设计在引物里面，但是pcr后的片段是双链平末端，需要将设计的酶切位点粘性末端暴露出来，所以需要酶切处理。

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第1个回答 2013-08-05

获取目的基因

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PCR扩增出目的片段之后为什么要酶切?酶切下来的是目的片段和载体?然 ...答：应为PCR扩增出来的是混合物，酶切回收后才基本是纯的目的片段。载体一般不用PCR扩增，一般是质粒来源，也需要用切口一致的酶消化回收。之后连起来就好了

如何对PCR扩增的产物进行酶切?答：个人认为需要对PCR产物进行酶切分析通常是为了或基因表型分析，由于Taq，Pfu等高温聚合酶在酶切温度（37度或更高）下，仍然保持一定的活性，高温聚合酶所具有的聚合或无模板添A或外切修正的功能仍在一定的程度上表现出来，可能会影响到酶切产物末端的正确性。结果是要么装不上去，要么装上去切不下来...

...用PCR获得目的基因,其中涉及的引物为什么要加酶切位点?难道不论载体...答：获得目的基因后一般需要将目的基因连接到质粒载体上，在引物上加酶切位点可以使后续的连接过程简单、可控。因为可在载体和目的基因上酶切产生相同的切口。也有不需要加酶切位点的T载体，但连接过程效率不高还会有反向的错误连接。

请问PCR中的酶切鉴定程序到底是想鉴定个啥呀?为何用酶切鉴定就可以鉴定...答：其实酶切并不能准确鉴定，而是因为方便成本又低。一般做克隆时在涉及引物时会加入酶切位点，这样PCR后用相应的酶去切产物，大体上可知道产物大小是否符合预期，进一步的鉴定还是要测序

提质粒的目的是什么?酶切的目的是什么?答：提质粒的目的是去除 RNA，将质粒与细菌基因组 DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。酶切的目的是对粘末端的DNA分子和载体分子进行切割，以获得相应的粘末端连接。酶切可以是单酶切也可以是双酶切。

pcr引物设计为什么要引入酶切位点答：这个不是必须的，要看你的实验要求。加酶切位点的目的是方便进行下面的克隆；如果你只是用于PCR鉴定等，添加酶切位点反而不好。

如何对PCR扩增的产物进行酶切?答：1. 首先确认PCR产物，取一小部分PCR产物跑胶。2. 如果产物良好，一个特异性很强的条带，则用过柱的方法提纯（就是你平时用的从溶液中纯化DNA的试剂盒就可以）。楼上说的跑胶后再提，早就过时了。效率很低。3，提纯加入限制性内切酶缓冲液，酶。按照平时的方法反应就可以了。4. 酶切后再过柱...

在PCR扩增基因时为什么要用限制性内切酶答：应该是酶切PCR产物吧，因为做基因多态性，可能你的基因在不同生态型里面序列是有变化，那么这些变化怎么检测出来，最终极的方法就是测序，能准确的知道那些位置上的碱基序列不一样，第二个就是先把这一段基因序列PCR扩增放大量，然后用个酶进行酶切PCR产物，看看不同模板的酶切带型是不是一样的，有的...

酶切与PCR之间有什么联系答：首先说区别，酶切是把连续的碱基序列（DNA或者RNA）切断，PCR是把单个的核苷酸单体连接成链状DNA。硬说他们有联系的话，只能这么理解，基因工程过程中，构建质粒载体的时候，我们先PCR扩增目的基因，然后经过酶切之后，得到合适的末端，这样就可以把目的基因跟载体连接起来了。

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