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酶切体系如何建立?
对质粒的重构
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推荐答案 2011-08-01
切质粒的话一般20ul体系就可以 质粒3-4ug, 酶1ul 然后就是buffer bsa h2o 如果质粒浓度比较小就用50ul体系
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酶切体系如何建立?
答:
切质粒的话一般20ul
体系
就可以 质粒3-4ug,
酶
1ul 然后就是buffer bsa h2o 如果质粒浓度比较小就用50ul体系
酶切
技术的酶切实验
答:
操作步骤1.反应
体系
的
建立
:⑴在一无菌1.5mlEppendorf管中加入:?无菌双蒸水7μl?10×
酶切
缓冲液2μl?质粒DNA(100ng/μl)10μl?EcoRⅠ(5U/μl)1μl?总体积为20μl⑵轻轻混匀,12000rpm离心5sec。2.37℃水浴1h。3.将Eppendorf管置65℃水浴中10min,通过加热使酶失活以终止反应。4.12000...
Ecor1 和 Nco1双
酶切体系
的配制
答:
你用的是哪个公司的
酶?
不同公司的buffer不一样的。不过,对于一般的体系,可以选择10微升体系或20微升体系。具体是1/10体积的buffer,酶的总体积控制在1/10以内,比如10微升
体系酶
量不要超过1微升,20微升体系不要超过2微升。DNA加入1~1.5微克即可。用水补足体积。
Xho1和Nde1 50μl双
酶切
反应
体系
的配制
??
答:
如果选用TaKaRa的限制性内切酶那么Buffer应使用H Buffer,对于50 μl的
酶切体系
而言应分别加入1.5 μl的Xho1和Nde1并且加入5 μl的10×H Buffer(使得酶切体系中的Buffer浓度为1×工作浓度),最后加入适量的质粒分子并双蒸水补足反应体积至50 μl。
双酶切
酶切体系
和buffer
怎么
设计比较合适?
答:
体系
不管多大,都有相应的buffer,只要将buffer变为1X工作浓度就行了,两个同时切的话,需要注意酶的量,看单位是多少,一般是1ul的
酶切
1ug的质粒或者其它DNA序列,尽量酶的体积不能超过体系的10%,因为里面含有甘油,可能会影响酶切效率。
takara公司的EcoR1和Not1 50μl双
酶切
反应
体系
的配制?
答:
酶各加1.5 ul,底物加入在2ug,37℃,1*H Buffer+BSA,
酶切
12小时。
DNA
酶切
及凝胶电泳的操作步骤
答:
2、 混匀反应
体系
后,将eppendorf管置于适当的支持物上(如插在泡沫塑料板上),37℃水浴保温2-3小时,使
酶切
反应完全。3、 每管加入2μl 0.1mol/L EDTA(pH8.0),混匀,以停止反应,置于冰箱中保存备用。 1、 取5×TBE缓冲液20ml加水至200ml,配制成0.5×TBE稀释缓冲液,待用。2、 胶液的制备...
酶切体系
酶切
答:
关于
酶切体系
,酶切这个很多人还不知道,今天来为大家解答以上的问题,现在让我们一起来看看吧!1、电泳模糊先检查你的做胶问题。2、一定要等完全凝固了才能用。3、拔出梳子后你可以看一下加样孔,如果孔底部是矩形,边角分明的就是好的,如果是弧形的就是不好的,跑出来没条带都有可能。
...在做pcr之前构建内切
酶体系
还是之后还是之中
?怎么
构建?只要按照说...
答:
在做PCR之前构建,因为PCR就是体外DNA扩增,你放进去什么DNA,它就扩增什么DNA。你用限制
酶切
下载体(质粒)和目的基因片段,再用DNA连接酶,组成重组质粒,这样构建就可以了,放进PCR仪中,它自动扩增 这个酶要求是耐高温酶,建议添加Taq酶
大家正在搜
酶切载体的体系
单酶切体系
50ul酶切体系
20ul酶切体系
单酶切10ul体系
ecor1酶切体系
酶切体系是什么
50ul双酶切体系
质粒酶切体系
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