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双酶切buffer通用表
HindIII和EcoRI
双酶切
用NEB哪个缓冲液,还有BamHI 和HindIII双酶切用哪...
答:
推荐的是
buffer
3.1,但是这个buffer这两个
酶
都没带,而且因为在3.1中貌似活性都只有50%左右,所以酶的用量得增加,而且时间得加长。如果实在不行,就分别切好了。网页上
表格
看得比较清楚(https://www.neb.com/tools-and-resources/interactive-tools/double-digest-finder?enzyme1={2F6573A8-32BE-...
两种酶的反应缓冲液不一样,做
双酶切
时如何处理?
答:
如果是分开
酶切
的话,第一个酶切完成后要回收(可用醇回收,效率比较高)后,再进行第二次酶切。做转化的时候,进行酶连接反应时,注意保持低温状态,因为LIGASE酶很容易降解。为保险起见,一般连接3小时,16度;对含有AMP-RESISTENCE的质粒铺板时,注意加AMP时的温度,温度过高,会使克隆株无法筛选出来。
SacI 和BamHI
双酶切
用什么
buffer
答:
NEB的话,BamHI是用buffer2,,3,4 ,酶活性都是100%,SacI是buffer1,4,酶活性是100%
。所以双酶切的话用buffer 4 好了。其他公司的酶的话,可以查目录或者网上的资料,看每种酶在不同buffer中的酶活性,然后选双酶切的buffer。
Xbal和XhoI
双酶切
的共用
Buffer
是什么?Fermentas公司的酶!
答:
登录到fermentas的网站上最上方,在tool部分有一个Doubledigest的工具,点击点击进去以后,把你要切的两个
酶
勾上,提交,就会给出相应的
buffer
的建议。We recommend:
Buffer
2X Tango™2-fold excess of XbaI XhoI Incubate at 37°C 而且还可以看到每一种酶在此buffer中的活性,由于XbaI在2XTango...
BamHI NdeI
双酶切
用哪种缓冲液
答:
TaKaRa的
酶
的话,用K
buffer
。
双酶切
的20μL反应体系和反应时间如何确定?最好是说明原理。所用的...
答:
5ul 酶2 0.5ul buffer 去Takara产品目录查
双酶切buffer表
,按照那个倍数加,有时候需要BSA 水补足 20ul 30或37度,1-5小时都可以。有个别酶需要55度。注意,酶别加多了,甘油浓度过高影响酶的活性。反应体系中甘油浓度要小于1%,而酶是储存在50%甘油中。
分步
双酶切
答:
我可以告诉你步骤:如果两种
酶
的
buffer
浓度相同可以同时加进去切,如果不相同,先用低浓度切,再用高浓度切。我只说后一种:30/50ul体系中2ul第一种酶,3ul buffer,按照你pcr产物的亮度来配比,不足部分用水补充,反正达到30ul就可以了,切两个小时后,加第二种酶2ul,buffer5ul,用水补到50ul...
neb
buffer
2可以用takara的什么buffer代替
答:
不同公司的酶和
buffer
命名和特性是不完全一样的。像takara公司的内切酶有一个
双酶切
的列表,列出了每两种酶双酶切最适用的buffer。像NEB公司的话,酶4种buffer中的活性都列出来了,选一个两种酶活性都高的就可以了。其他公司的产品也一样,主要是认真阅读说明书和产品资料。祝你好运。
双酶切
好还是分步酶切好
答:
双酶切
反应 (Double Digests)1、同步双酶切 同步双酶切是一种省时省力的常用方法.选择能让两种酶同时作用的最佳缓冲液是非常重要的一步.NEB每一种酶都随酶提供相应的最佳NE
Buffer
,以保证100%的酶活性.NEBuffer的组成及内切酶在不同缓冲液中的活性见《内切酶在不同缓冲液里的活性表》及每支酶的...
Takara的NheI 和BamHI
双酶切
体系表中没有双酶切缓冲体系应该如何选用缓 ...
答:
1、如果你用的是Takara的
酶
,应该就只能分步了,而且BamHI还是30度反应,虽然也可以在37度切,但如果是分步切的话还是用30度吧。2、为什么不用NEB的酶呢?可以用
buffer
1或2同时切(好像是,你需要自己再确认下),而且NEB的这两种酶都有HF酶,效率更高,都可以在buffer4中达到100%的效率。以上,...
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