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大肠杆菌扩增质粒
质粒扩增
的步骤
答:
挑选菌落:从LB培养基上挑选菌落备用细菌培养( ):将挑好的菌落放到
大肠杆菌
培养液当中,并于37摄氏度培养箱中以250rpm摇动8~12h,使大肠杆菌繁殖裂解抽提:采用细胞裂解的方式,从含目标质粒的大肠杆菌菌液中将质粒提取出来
dh5α感受态细胞不表达自身的质粒吗?
扩增质粒
后提取质粒的时候会不会...
答:
你好!dh5α感受态细胞是常用的细菌
质粒扩增
提取细菌,其本身是含有质粒的。普通的
大肠杆菌
细胞内有一种“免疫”机制,即当外源DNA 侵入时,会产生酶类将外源DNA切除,无法进行复制增殖。而其自身质粒的基因组被修饰(如甲基化)所以不被限制酶识别,不会被剪切。DH5α菌株是一种经诱变的菌株,其基本特...
大肠杆菌质粒
DNA
扩增
时引物序列是什么?是碱基序列。它的质粒DNA都一样...
答:
E.coli有很多种质粒。不同菌株具有不同的质粒。不同质粒的DNA序列不同。如果你说(完整)
质粒扩增
,只需要培养细菌就可以,质粒本身就可以自行复制(扩增),达到扩增目的。需要引物(碱基序列)进行PCR体外扩增的的指的是一小段DNA序列(而不是完整的质粒或染色体)的扩增或克隆。希望你能明白。
大肠杆菌
DH5α可以用来
扩增
重组
质粒
,但是它自身带不带质粒?提质粒时是...
答:
大肠杆菌
DH5α它本身应该是含有
质粒
的,但是你转进去的重组质粒是你自己已知的质粒和你自己知道DNA片段组成的重组质粒,所以它的大概碱基大小你自己应该知道,所以你提出质粒后,你可以跑回收胶,将你提出的样品全部加入胶孔,还有就是你必须同时跑一个空质粒载体作对照,最后把你的目的重组质粒进行切胶回...
我从国外要回的
质粒
,有谁知道下一步该怎么处理
扩增
啊?请写具体一点,试 ...
答:
这个时候一般是先制备感受态的
大肠杆菌
,一般是用CaCl2处理,现在也有商品化的感受态,一般菌株为DH5α。具体制备方法搜一下“感受态细胞制备”就有。然后一般取50-100ng
质粒
加入100ul的感受态细胞里,进行热激处理,这个操作方法网上也有,一般是感受态细胞(-70°C取出才有这一步)冰上融化,加入质粒,42...
人胰岛素原基因和
质粒
能在
大肠杆菌
内一起
扩增
马
答:
能。任何DNA片段(不仅仅是功能基因)都可以在重组
质粒
上,随着质粒的复制而被复制,得意
扩增
。但所表达的蛋白质(如你这里的人胰岛素)有没有活性,则必须经过蛋白质纯化后的生物学功能验证才能知道。由于真核生物蛋白质加工成熟过程不同于原核生物,肽链的一级结构即便正确,也未必会形成有活性的高级...
质粒扩增
的介绍
答:
质粒扩增
是大量获取质粒的一种化学生物学方法,通常包括将细菌质粒转化到
大肠杆菌
中,然后从大肠杆菌中收获大量质粒的过程。
重组
质粒
已成功转入
大肠杆菌
内,-20°冻存,怎样复活,扩大培养?
视频时间 1:10
能从kod
扩增质粒
上扩增片段吗
答:
能。KODDNAPolymerase是从克隆有ThermococcuskodakaraensisDNA聚合酶基因的质粒在
大肠杆菌
中经诱导表达分离纯化而来。该酶所具有的超强3’→5’外切酶活性使得其扩增保真性比PfuDNAPolymerase更高,保真性是Taq的约50倍,同时具有合成速度快的特点。能从Kod
扩增质粒
上扩增片段。聚合速度约为普通PfuDNAPolymerase...
大肠杆菌质粒
DNA怎样提取,用什么方法?
答:
碱裂解法:此方法适用于小量
质粒
DNA的提取,提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR
扩增
、银染序列分析。方法如下:1、接1%含质粒的
大肠杆菌
细胞于2ml LB培养基。2、37℃振荡培养过夜。3、取1.5ml菌体于Ep管,以4000rpm离心3min,弃上清液。4、加0.lml溶液I(1%葡萄糖,50mM/L EDTA pH8.0,25mM/L...
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