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WB内参差多少才算齐
GAPDH,Tubulin,Actin选哪个做
WB内参
更好?
答:
2. 分子量差异:确保目的蛋白与
内参
分子量至少
相差
5kD,便于分析。3. 实验处理影响:GAPDH等可能受诱导处理影响,需谨慎选择。4. 定位和细胞成分:做蛋白定位时,选择对应细胞组分的内参,如膜蛋白和核蛋白。5. 总蛋白作为标准:尽管管家基因的差异性大,但总蛋白提取不受影响,线性范围更广,建议作为...
western blot
内参
actin 是43还是45 kda
答:
选择内参抗体时,应该考虑目的蛋白分子量的大小。
通常应该保证目的蛋白与内参蛋白分子量相差5KD以上
。比如检测目的蛋白分子量为45KD,此时不适宜选择β-actin(42KD)作为内参,可以考虑选择GAPDH(36KD)作为内参。3)目的蛋白表达部位 a、胞浆和全细胞蛋白:β-actin(43KD)、GAPDH(37KD)、Tubulin(5...
WB的无敌战神之路——
WB的内参
选择
答:
在使用
内参
时,要区分直标抗体(需要高表达)和普通抗体,以满足不同检测需求。关键在于精准定量、保持内参稳定性,以及微调样本加载量和线性浓度范围,理想情况下,蛋白样本5-10 μg,内参5 μg是个不错的选择。
westernblot
内参
GAPDH成功了
答:
1.蛋白测定之后要加5X SDS上样缓冲液,该怎么加呢?
是
所有的标本一起加了,还是就算准备上样的量?经中心试验室CWW指点后才知道,可以一起加了。就是把蛋白样品的体积除以4就是了,这样的5Xbuffer就变为了1X。2.紧接着是配胶,也是一堆问题。过硫酸铵(AP),给我的是一支0.5g干粉,说明书说...
Western blot
内参
跑不齐怎么调整
答:
第二,
内参
跑不齐。一般是跑胶时电流或电压太大。还有可能是样品中参杂着盐离子等其他物质也会造成跑不齐。第三,PAGE胶的制备也很关键。看到条带信号连在一起,一方面因为胶不好,样品扩散,另一方面蛋白表达量 高,曝光时间长。第四,转膜的效率会不会是不一致的,一抗、二抗的接合GAPDH不好。
【求助】
WB
上样量应为
多少
?
答:
>这要根据你做的蛋白表达量多少,一般是用DAB显色要50-100μg,用ecl曝光上样量为20-40μg。但根据你蛋白表达量的不同目标蛋白绝对量DAB法至少50pg,ecl法至少20pg。我也用组织作过western,蛋白浓度的确很高。通常我上50-100ug,足够了。如果蛋白浓度太高导致上样过小,可用裂解液稀释蛋白使总上...
wb内参是
什么意思
答:
wb内参是
WesternBlotting实验内部参照。wb内参是WesternBlotting实验内部参照。蛋白质印迹法(免疫印迹试验)即WesternBlot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。内部参照,一般是指由管家基因编码表达的蛋白,它们在各组织和细胞中的表达相对恒定,在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做...
wb
投稿
内参
只要放一张吗
答:
在WesternBlot中使用
内参
其实就
是
在
WB
过程中另外用内参对应的抗体检测内参,这样在检测目的产物的同时可以检测内参的表达,由于内参在各组织和细胞中的表达相对恒定,借助检测每个样品内参的量就可以用于校正蛋白质定量、上样过程中存在的实验误差,保证实验结果的准确性。此外使用内参可以作为空白对照,检测蛋白...
WB
相关技巧--quantity one软件调节
内参
答:
1.跑
WB
有时候不想做PCA定量怎么调节
内参
呢? 解答:有老司机认为凭借经验可以用肉眼看出来差异,可是对于新手来说总不能做个几百次才像他们获得经验吧,这时候定量就是急需的内容了,对不对? 解决方法呢? 一般可以用image J 软件或者quantity one软件进行操作, 原理为 :image J ...
WB内参
的表达不一样怎么办。提完蛋白后用BCA试剂盒定量,可是后来跑出...
答:
那很有可能
是
定量的时候不准,建议你根据
内参
条带的亮度调整上样量,保证内参一致的情况下再看目的条带的变化
1
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4
涓嬩竴椤
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审稿人说wb条带是剪切的
wb内参不齐 数据能用吗
内参灰度值差距多大算齐