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双酶切用什么buffer
Ecor1 和 Nco1
双酶切
体系的配制
答:
你用的是哪个公司的
酶
? 不同公司的
buffer
不一样的。不过,对于一般的体系,可以选择10微升体系或20微升体系。具体是1/10体积的buffer,酶的总体积控制在1/10以内,比如10微升体系酶量不要超过1微升,20微升体系不要超过2微升。DNA加入1~1.5微克即可。用水补足体积。
...的EcorI和Hind3是否可以进行
双酶切
,加
什么buffer
怎么查啊?能说的...
答:
可以啊 都是HF的用
BUFFER
4 不然的话用2 NEB网站看一下不就行了
转化后菌液pcr有目的条带,然后提质粒和
双酶切
验证。但是没有得到目的条...
答:
我觉得用elution
buffer
没太大的影响,如果你非要觉得不好的话,只能在转化一遍重新提质粒或者抽成干粉再加水。我们一般用水就行。实在不行去测序呀。提的质粒和空质粒可以比较,如果你插入的基因足够大,实在不行多跑跑。然后看大小比较。
酶切
的话还是要看你的酶的活性。要是快切酶的话只要五分钟,...
nde1和not1
双酶切
效率高吗
答:
由这两种酶组成的
双酶切
体系并不需要添加BSA,请你仔细核对,两种酶的最适反应温度均为37摄氏度所以双酶切温度应为37摄氏度。 如果选用TaKaRa的限制性内切酶那么
Buffer
应
使用
H Buffer,对于50 μl的酶切体系而言应分别加入1.5 μl的Xho1和Nde1并且。
takara公司的EcoR1和Not1 50μl
双酶切
反应体系的配制?
答:
酶各加1.5 ul,底物加入在2ug,37℃,1*H
Buffer
+BSA,
酶切
12小时。
双酶切
的20μL反应体系和反应时间如何确定?最好是说明原理。所用的...
答:
模板DNA 几百ng-几ug,区别不大 酶1 0.5ul 酶2 0.5ul buffer 去Takara产品目录查
双酶切buffer
表,按照那个倍数加,有时候需要BSA 水补足 20ul 30或37度,1-5小时都可以。有个别酶需要55度。注意,酶别加多了,甘油浓度过高影响酶的活性。反应体系中甘油浓度要小于1%,而酶是...
双酶切
酶切体系和
buffer
怎么设计比较合适?
答:
体系不管多大,都有相应的
buffer
,只要将buffer变为1X工作浓度就行了,两个同时切的话,需要注意酶的量,看单位是多少,一般是1ul的
酶切
1ug的质粒或者其它DNA序列,尽量酶的体积不能超过体系的10%,因为里面含有甘油,可能会影响酶切效率。
双酶切
好还是分步酶切好
答:
双酶切
反应 (Double Digests)1、同步双酶切 同步双酶切是一种省时省力的常用方法.选择能让两种酶同时作用的最佳缓冲液是非常重要的一步.NEB每一种酶都随酶提供相应的最佳NE
Buffer
,以保证100%的酶活性.NEBuffer的组成及内切酶在不同缓冲液中的活性见《内切酶在不同缓冲液里的活性表》及每支酶的...
为
什么
要两种
酶
才能切割基因(两端要不同的限制酶),不能是同一种吗...
答:
虽然一种限制酶只能识别一种特定的氨基酸序列,但两种限制酶识别的序列可以相包含,例:酶A识别GGATCC序列,酶B识别GATC序列,则GGATCC序列就可以被两种限制酶切割。同步
双酶切
同步双酶切选择能让两种酶同时作用的最佳缓冲液是非常重要的一步。NEB每一种酶都随酶提供相应的最佳NE
Buffer
,以保证100%的酶...
NE
Buffer
是
什么
意思。
答:
NE
Buffer
意思是NEB(New England Biolabs)公司生产的能同时作为两种
酶
的公用的
buffer
。 就是这两种酶可以用同一种buffer,而酶的活性不会受影响。NEB(北京)有限公司 New England Biolabs (Beijing) LTD. NEB(北京)有限公司New EnglandBiolabs (Beijing) LTD. 为美国New England Biolabs,Inc.在华投资...
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